食品微生物检测.ppt

食品微生物检测

实验部分教材大纲第一部分消毒进入无菌室前的准备1.1实验前放好需用的实验器材及各种培养基，打开紫外灯消毒30－60min。1.2手部的消毒：进入无菌室前，先用肥皂清洗双手，在消毒水中浸泡双手3min后用水冲洗。1.3进入缓冲室：换鞋子或穿鞋套，戴口罩、帽子、手套，穿衣服（有风淋室的，需在风淋室转动站立5min）。称样品2.1手部的消毒2.2镊子、剪刀、勺子的消毒。2.3样品包装口的消毒（一个样品换一把镊子、剪刀或勺子）。实验结束后的消毒1用过的实验器材经高温消毒后再清洗。2实验台面用消毒水擦洗干净。3换下的鞋套、口罩、帽子、衣服放入专用垃圾袋进行消毒处理。4清洗双手：先用肥皂清洗双手，在消毒水中浸泡双手3min后用水冲洗，再用肥皂清洗双手。5打开紫外灯消毒30－60min。第二部分菌落总数测定检验依据GB/T4789.2－2003菌落总数的定义食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、PH、需氧性质等），所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。设备和材料冰箱电子天平均质器恒温水浴锅恒温培养箱干燥箱架盘药物天平灭菌吸管：1mL、10mL灭菌培养皿：直径90mm灭菌剪刀、镊子、勺子等酒精灯培养基和试剂01营养琼脂0285％灭菌生理盐水0375％酒精棉球04检验程序检样稀释及培养1.1以无菌操作将检样25g（mL）剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水的塑料瓶内，经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中处理。1.2用1mL灭菌吸管吸取1：10的稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。1.3另取1mL灭菌吸管，按1.2操作方法，做10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。4根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2（可放置46℃±1℃水浴锅保温）注入培养皿约15mL，并转动培养皿使混合均匀。同时将营养琼脂注入加有1mL稀释液灭菌培养皿内作空白对照。5稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃左右营养琼脂养48h±2h。6待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃恒温培养箱内培琼脂表面长菌说明空气中带菌，平皿边上长菌说明平皿受到污染，琼脂中间长菌说明稀释液或琼脂带菌。7作空白对照的作用菌落总数操作步骤25g(mL)样品225mL0.85%灭菌生理盐水1mL1mL1:10约15mL营养琼脂吸取1mL

9mL0.85%

灭菌生理盐水

1mL1mL1:100约15mL营养琼脂36℃±1℃,培养48h±2h菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。记下各平板的菌落数，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。菌落计数的报告3.1选取菌落数在30－300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数。若两个平板中有一个平板有较大片状菌落生长时，应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落生长不到平板的一半，而其余一半菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数，再采用两个平板平均数作为该稀释度的菌落数。平板内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），一条链可视为一个菌落计数。2稀释度的选择3.2稀释度的选择选择平均菌落数在30－300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表1中例1）。若两个稀释度的平均菌落数均在30－300之间，则视两者之比决定。若比值≤2，报告其平均数；若＞2，报告其中较小的数字（见表1中例2及例3）。若所有稀释度的平均菌落数均大于300，按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见表1中例4）。若所有稀释度的平均菌落数均小于30，按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数（见表1中例5）。若所有稀释度均无菌落生长，以小于1乘以最低稀释倍数见表1中例6）。若所有稀释度的平均菌落数均不在30－300之间，其中一部分大于300，一部分小于30时，按最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（见表1中例7）。菌落数在100以内时，按其实有数报告；大于1100时采用两位有效数字：小于5舍去，大于5进一位23菌落数的报告表1稀释度的选择及菌落数报告方式例次