木瓜蛋白酶的纯化和性质_cropped.doc

 文章编号 :1007 —5570 (2002) 01 - 0011 - 04 Ξ 木瓜蛋白酶的纯化和性质 乙引 ,张显强 ,唐金刚 ,罗在柒 (贵州师范大学 生物科学技术系 ,贵州 贵阳 550001) 摘要 :探讨木瓜蛋白酶的理化性质 ,对番木瓜未成熟果实乳汁进行真空干燥 、( N H4 ) 2 SO4 沉淀和 SP - Sep hadex 50 柱层析 ,分别得到木瓜蛋白酶的粗酶 、精酶和纯化酶 ,可用于不同的工业用途 。同时 ,对纯化的木瓜蛋白酶进行 了分子量 、等电点 、巯基数目 、圆二色性 、反应动力学以及 N - 末端和 C - 末端氨基酸序列等性质的研究 ,为该酶 的进一步开发提供科学依据 。 关 键 词 :木瓜蛋白酶 ;纯化 ;性质 中图分类号 :Q55 文献标识码 :A Purif icat ion an d characterizat ion of pa pa in YI Yi n , ZHAN G Xian2qiang , TAN G J i n2gang ,L U O Zai2qi (Depart ment of Biological Science and Technology , Guizhou Normal U niversity , Guiyang , Guizhou 550001 , China) Abstract : Papain in unripped f ruit of Ca rica p a p ay a was p urified by vacuum desiccatio n , ( N H4 ) 2 SO4 depo sit and SP - Sep hadex 50 chro matograp hy. The p ro duct s of each p rocess had t heir use fo r i ndust ry. In t he meantime ,t he p roperties of p urified papain were st udied ,such as molecular weight , isoelect ric point ,sulf hydryl number ,circular dichroism ,reactio n kinetics ,and amino acid sequence of N2and C2ter minals. The result s can p rovide scientific basis fo r t he f urt her develop ment of papain . Key words : papain ;p urificatio n ;characterizatio n 剂 ,用于治疗消化不良 、各种炎症和水肿 ,防止腹膜 粘连 ,处理血检及创伤脱痂 ;此外 ,它还可以用于研 究蛋白质结构1 。 早在 1873 年 , Roy 就报道了番木瓜果实的乳 汁可作为酶的来源2 。以后的研究表明 , 番 木 瓜 未成熟果实中含有木瓜蛋白酶 、木瓜凝乳酶 、木瓜 肽酶 A 、木瓜肽酶 B 等多种蛋白水解酶 。其中 ,木 瓜蛋白酶属巯基蛋白酶 ,可水解蛋白质和多肽中精 氨酸和赖氨酸的羧基端 。近年来 ,虽然有关木瓜蛋 白酶的研究工作已有很多报道3 27 ,但大多集中于 0 前言 木瓜蛋白酶广泛存在于番木瓜茎叶和果实中 , 以未成熟果实的乳汁中为最高 。因其含量高 、稳定 性好 、蛋白水解能力强 ,对多种蛋白质均具有很好 的降解作用 ,目前已被广泛应用于各个行业 。在食 品中 ,用于肉类嫩化 、啤酒澄清 、饲料添加剂 ,饼干 松化剂和鱼类加工 ;在工业上 ,用于明胶制造 、蚕茧 脱胶 、皮革脱毛等 ; 在医疗卫生方面 , 用于驱肠虫 收稿日期 :2001 - 09 - 19 气 ,加入 0125 mL l mol/ L KH2 PO4 - 012 mol/ L HCl 溶液 , 5 min 后 加 1 mL 丙 酮 , 密 封 , 振 荡 试 管 , 使 NaB H4完全分解 。通氮气 5 min ,加 0125 mL 0101 mol/ L D TNB 水溶液 ,用水定容至 3 mL ,通氮气 2 min ,密封 ,静置 15 min ,测 412 nm 的吸光度 。 11216 Cys 含量测定 木瓜蛋白酶经过过甲酸氧 化 ,6 mol/ L HCl 水解 ,用氨基酸自动分析仪测定 。 11217 N - 末端氨基酸序列测定 用丹酰氯法测 定 11218 C - 末端氨基酸序列测定 取 215 mg 木瓜 蛋白酶溶于