外周血提取dna及dna电泳检测.pptx

实验二十五 真核基因组DNA分离纯化 ─外周血白细胞提取DNA（NaI法）;实验二十五 NaI法提取外周血白细胞 DNA 学时数：3 教学目的:掌握NaI法提取外周血白细胞DNA的原理和方法。 教学重点:实验原理与过程 教学难点:实验原理与方法 使用教具:多媒体 教学方法:互动式、讨论式教学法 讲授内容纲要、要求及时间分配 ?导入：（用一部著名电影导入正题，激发学生探索生命奥秘的兴趣） 1~2 min 交代正题： NaI法提取外周血白细胞DNA 1 min （一）实验目的（简明扼要） 1 min （二）实验原理（提出问题，学生阅读，在问题中理解实验原理） 12~14 min （三）实验材料 3 min （四）实验步骤（思路清晰，结合原理讲解） 15~16 min （五）注意事项 2 min （六）实验报告 1 min;引言：1min　　 美国好莱坞电影《侏罗纪公园》总票房超过3亿美元同时也创造了一种大胆的科学设想：一只蚊子吸取了恐龙的血液，蚊子恰巧又被琥珀完美保存至今日，科学家因此获取了恐龙的DNA，再现了恐龙时代。;真核基因组DNA的分离纯化;核酸的分离纯化; NaI法提取外周血白细胞DNA; 1.NaI起什么作用？ 2.如何将DNA从蛋白质中释放出来？ ; 实验原理：从全血制备白细胞DNA，可用双蒸水溶胀红细胞及白细胞膜，释放出血红蛋白及细胞核，使核酸处于易提取状态，加NaI破核膜并使DNA从核蛋白中解离，用氯仿/异戊醇抽提使蛋白质沉淀完全，DNA存在于上层水相中，以异丙醇沉淀DNA，离心弃去异丙醇，并重复操作一次，即可获得白细胞DNA。;实验材料;1.取消毒EP管，做好标记，取外周抗凝血（全血）100ul于EP管中，以10000rpm离心1min 。 2.弃上清，加双蒸水200ul溶解，摇匀20s。（破红细胞、白细胞膜） 3.混匀后加6M NaI溶液200ul，缓慢摇匀20s。（破核膜,使DNA从核蛋白中解??） 4.加入氯仿/异戊醇（24﹕1）400ul，边加边摇，摇匀20s，12000rpm离心12min。 ;7.弃37％异丙醇，敞开EP管盖,倒扣在滤纸上将37％异丙醇吸干,或放在超净台上吹干，加1xTE溶液30ul，溶解DNA＞12h以上，制成的DNA液以琼脂糖凝胶电泳鉴定或-20℃冰箱保存。;2.混匀试剂、吸取上清等操作时避免动作剧烈。 3.弃异丙醇时动作应轻，切忌甩干，以免DNA丢失。 4.DNA沉淀中的异丙醇难以挥发除去，所以常规需要70%的乙醇漂洗DNA沉淀物。;实验题目 实验目的 实验原理 实验仪器 实验步骤 实验过程及实验数据记录 实验数据处理与分析，并得出结论 ?;