仪器分析实验薄层色谱.pptx

色谱法是分离纯化和鉴定有机物的重要方法之一。 色谱法可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱及高效液相色谱等类型。 2011年4月1日薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC) 固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对照物质）比较进行定性定量。 2011年4月1日 薄层色谱基本原理 薄层色谱（Thin Layer Chromatography）常用TLC表示，它是将固定相均匀地涂在薄板（如玻璃板）上，依靠毛细作用力或重力，使流动相通过固定相的一种色谱。 2011年4月1日特点：快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。试样预处理简单，对试样限制少。 载样量比较大，适用于制备。 仪器简单，操作方便。分离能力较强。 灵敏度较高。2011年4月1日薄层色谱法的主要类型和吸附色谱原理 吸附薄层色谱法原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、 再吸附、再解吸附的过程。 吸附系数不等实现分离。　一般极性强的组分K大，Rf（比移值）小；极性弱的组分 K小，Rf值大。分配薄层色谱法　吸附薄层色谱的吸附剂吸附剂硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。 原理：硅醇基(吸附中心)与极性基团形成氢键（吸附性）。 组分与硅醇基形成氢键（被吸附）的能力不同而分离。　应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等 硅胶活度与含水量的关系：含水量高，活性级数高，活度低。活化：加热至105℃左右，除去吸附水提高活度。（注意温度不可过高）2011年4月1日吸附薄层色谱的展开剂(流动相)洗脱能力 极性强的溶剂洗脱能力强 常用溶剂的极性强弱顺序：　水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳环己烷石油醚。 吸附薄层色谱的展开剂（混合剂） 先用单一溶剂展开，若Rf值太小，则加入一定量极性强的溶剂，（如乙醇、丙酮等），如果Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)，以降低极性。定性参数1比移值(Rf值)溶质移动距离与流动相移动距离之比。 Rf =L/L0L为原点（origin）至斑点中心的距离，L0为原点至溶剂前沿（solvent front）的距离 与组分及色谱条件有关 实验二 硅胶粘合薄层的活度测定 一、实验目的 1．掌握粘合薄层的制备方法。 2．了解粘合薄层活度测定方法。二、实验原理 硅胶粘合薄层活度的测定方法，目前一般都采用Stahl（斯塔尔）活度测定法，以二甲黄、苏丹红G、靛酚蓝各40mg，溶于100ml挥发性溶剂中，滴加于薄层上，用石油醚展开10cm，应不移动，如改用苯展开则应分成三个斑点，其Rf值分别为：二甲黄0.58，苏丹红0．19（？），靛酚蓝0．08，展开时间约为30—40分钟，经本法测定合格的硅胶薄层其活度与柱色谱法所定活度的Ⅱ一Ⅲ级相当。2011年4月1日 三、仪器及试剂1．色谱缸2．二甲黄、苏丹红、靛酚蓝3．硅胶(色谱用)、羧甲基纤维素钠。2011年4月1日 四、操作步骤1．粘合薄层板的铺制： 称取羧甲基纤维素钠(CMC—Na) 0．75g，加入100ml水中加热使溶解，放冷，放置后取14ml,再分次加入硅胶5g，调成糊状后倒在清洁的玻璃板上，可幌动或转动玻板，使其均匀流布于整块玻板上，而获得均匀的液层。将玻璃平放晾干，然后于110℃活化40分钟，置干燥器中贮存备用。2011年4月1日2．点样： 取羧甲基维纤素硅胶板一块(7．5×15cm)在距板一端lcm处，用铅笔轻轻划一直线作为起始线，在起始线中点用铅笔作一标记(o)，用内径约lmm的平口毛细管点加混合溶液，其直径应为2—3mm。2011年4月1日 将点好的样晾干或吹干后将板置于盛有展开剂石油醚(沸点60—90℃)的色谱缸中，浸入深度为0.5cm，待展开剂前沿离起始线约10cm处，混合物应不移动，取出硅胶板，待石油醚挥发后，再按同法以苯为展开剂，展开时间约为30—40分钟，取出薄层板立即划出前沿线，待苯挥散，观察斑点的位置， 3.展开 2011年4月1日4 计算比移值（Rf）： 干燥后记录原点至主斑点中心，和原点至展开剂前沿的距离。测量Rf值，判断其活度。 斑点中心至原点的距离Rf＝ 溶剂前沿至原点的距离注意：因为同一物质在相同的实验条件下才具有相同的Rf值，所以在测定时，采用标准物质进行对照。 2011年4月1日 五、注意事项 1．活化后薄层板应贮于干燥器中，以免吸收湿气而降低活性。 2．点样量不宜太多，否则会拖尾分离不好。 3．展开剂苯中含水量的多少会影响Rf值，故须用于燥的苯和器皿。 4．展开剂不要加得过多，起始线切勿浸入展开剂中2011年4月1日六、思考题1.薄层色谱的铺板要领是什么？2涂层的均匀度对实验有何影响？