分光光法201610基础化学资料.pptx

第十三章;1.光的性质及物质对光的选择性吸收(了解) 2. 分光光度法的基本原理, Lambert-Beer 定律及有关计算(掌握) 3. 分光光度计的基本构造, 熟悉标准曲线法(了解) 4. 提高测量灵敏度和准确度的方法(了解) 5. 紫外分光光光法的一般概念(了解) ;▲分光光度法的基本原理及Lambert-Beer 定律 ▲可见分光光光法的测量方法。 ;分光光度法;分光光度法的分类;分光光度法特点：;分光光度法的应用;例2： 紫外分光光度法广泛用于生物试样中蛋白质（λmax=280 nm ），核酸的纯度分析（λmax=260 nm ）;第一节 物??的吸收光谱;1、光的基本性质 光是一种电磁波，具有波 粒二象性。 光的波长（λ）、频率（ν）与速度（c）的关系如下： ; 2. 物质对光的选择性吸收; ; ▲ 物质呈现的颜色与光有着密切的关系，不同波长的可见光可使眼睛感觉到不同的颜色。;▲单色光：具有单一波长的光;物质对光的吸收——有选择性;图示： CuSO4溶液呈蓝色;红;物质的颜色和其吸收光颜色的关系;;定性分析：由于不同物质结构不同，因此，吸 收的紫外光波长也不同，利用这一 性质可以鉴别物质。 定量测定：同一物质的稀溶液，浓度大的吸光度 的值较大，反之则较小，利用这一性 质可进行定量测定。; 第二节 分光光度法基本原理;一、透光率和吸光度;二、朗伯-比尔定律（光吸收定律） Lambert-Beer定律; 公式适用范围; 若用质量浓度ρ(g · L-1)代替物质的量浓度c，则;▲ 是有色物质的特征常数; 化合物组成不明，物质的相对分子质量( M )不知道，物质的量的浓度无法确定，无法使用摩尔吸光系数(ε);比吸光系数（specific absorptivity);三、吸收度的加和性;四、相关计算;例1：已知Fe2+ ? ：500μg·L-1 b：2 cm A：0.19 (λ508nm）;例13-1：教材P252  已知某化合物的相对分子质量为251，将此化合物用乙醇作溶剂配成浓度为0.150mmol·L-1的溶液，在480nm波长处用2.00cm吸收池测得透光率为39.8％ ，求该化合物在上述条件下的摩尔吸光系数ε和质量吸光系数a ？;a =ε∕M;小结：;第三节 可见分光光度法 (spectrophotometry);一、分光光度计( spectrophotometer) ;;;4、检测器 ：光电管;5、指示器;配制一系列标准溶液;选择适宜的空白溶液（参比溶液）;（二）标准对照法;第四节 提高测量灵敏度和准确度 的方法;本章要求; 作 业： P261 第6 ， 10题