细胞工程学实验内容实验一植物细胞培养基的种类与配制实.ppt

* 细胞工程学实验内容 ★ 实验一 植物细胞培养基的种类及配制 ★ 实验二 植物愈伤组织的诱导 ★ 实验三 植物愈伤组织细胞的培养 实验一 植物细胞培养基的种类及配制 一、实验目的 1、了解植物细胞培养基的种类及营养要求。 2、掌握MS培养基的配制方法。 二、实验材料 1、实验设备：高压灭菌锅、电子分析天平、pH计、超净 工作台。 2、实验器材：电磁炉、烧杯、量筒、搅拌棒、吸量管、 移样枪。 三、植物细胞培养基的种类 在100多年的植物组织、器官和细胞离体培养研究中，研制开发了数十种适宜不同植物、不同组织、不同细胞生长发育的培养基配方，但多数培养基是在几种普遍应用的培养基上演变而来的，其中应用最为广泛的仍为MS培养基。植物组织培养基早期的建立，如White提出的根培养基和Gautheret提出的愈伤组织培养基，都是由先前的用于整体植物栽培的营养液发展而来的。以后所有的各种培养基又都是在White培养基和Gautheret培养基的基础上形成的。各种培养基在无机营养组成上的差异主要是盐和离子数量上的不同。常用培养基中根据无机盐的含量可以分为4类，分述于下： 1、高无机盐含量培养基：高无机盐含量培养基中，钾盐、铵盐及硝酸盐含量较高，微量元素种类齐全，养分数量及比例较合适，广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。主要有MS培养基和ER培养基。 2、较高硝酸钾含量培养基：较高硝酸钾含量培养基适合于木本植物、十字花科植物和单子叶植物的组织和花药培养。主要有B5培养基和N6培养基。 3、中等无机盐含量培养基：中等无机盐含量培养基中，大量元素约为MS培养基的一半，微量元素种类减少，但含量较MS的高，适合于花药培养。主要有Nitsch培养基和NT培养基。 4、低无机盐含量培养基：低无机盐量培养基中，大量元素含量大幅降低而且种类减少，多数用于生根培养基。主要有White培养基和Heller培养基。 各种植物培养基的营养组成及配方如下表： 20 000 10 000 127 000 0.50 0.05 20 000 50 000 20 000 40 000 30 000 叶酸 生物素 蔗糖 D-甘露醇 0.05 0.01 0.01 3.00 100 1.00 100 5.00 0.50 0.50 2.00 0.50 0.50 1.00 2.00 100 1.00 1.00 10.00 0.50 0.50 0.50 2.00 100 0.50 0.50 0.10 2.00 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 盐酸硫胺素 甘氨酸 0.03 1.00 2.50 27.80 37.30 27.80 37.30 27.80 37.30 27.80 37.30 27.80 37.30 27.80 37.30 NiCl2·6H2O FeCl3·6H2O Fe2（SO4）3 FeSO4·7H2O Na2·EDTA·2H2O 0.03 0.03 0.001 0 .01 0.025 0.03 0.025 0.025 0.025 0.0025 0.0025 0.025 0.025 MoO3 CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O CoSO4·7H2O AlCl3 1.00 3.00 8.60 0.25 10.00 0.25 3.80 10.00 2.00 0.25 15.00 0.025 8.60 0.25 MnSO4·H2O ZnSO4·7H2O ZnSO4·4H2O Zn·Na2·EDTA Na2MoO4·2H2O 125 750 0.01 1.00 0.10 19.00 65.00 0.75 1.50 5.00 0.83 6.20 22.30 10.00 25.00 0.80 1.60 4.40 150 0.75 3.00 0.63 2.23 0.83 6.20 22.30 NaH2PO4·H2O KCl KI H3BO3 MnSO4·4H2O 6