人骨保护素(OPG)重组腺病毒的制备及其生物活性研究.pdf

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! ! ’( ) ! *’ ) ! 年 月 #$$% ! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,-.,/0 #$$% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 人骨保护素（ ）重组腺病毒的制备及其生物活性研究 !# ! # ! # ! % 刘继中 纪宗玲 胡蕴玉 陈苏民 朱帮福 杨彤涛 ! # % （第四军医大学 西京医院全军骨科研究所；生物化学与分子生物学教研室；唐都医院骨科 西安2!$$%# ） 摘 要 采用E41FGE 法得到人HFI 的编码区DJ*K，克隆至穿梭质粒LMN.::(5，构建重组有HFI 编码区DJ*K 的腺 病毒J*K，经F,D O 酶切线性化，在脂质体介导下转染PQ#% 细胞，制备重组腺病毒并测定病毒滴度约为8 R !$7 S !T8 R !$2 。体外感染小鼠成肌细胞 ， 及 检测证实有 蛋白的表达，并可在细胞培 LB.U=V G#G!# W5X:5/- Y(’: VOMK HFI 养上清中持续表达 周。感染 重组腺病毒的 细胞生长状态良好、细胞周期无明显变化。将重组腺病毒 7 HFI G#G!# 加入体外培养的小鼠骨髓细胞的培养基中，诱导形成的破骨细胞数量及在象牙片上形成的吸收陷窝的数量显著减 少（ ）。 F Z $ T$! 关键词 骨保护素，重组腺病毒，破骨细胞 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） [26 K !$$$1%$7! #$$% $!1$$%81$7 骨保护素（ ， ），或称破骨细胞 GE_‘），抗酒石酸酸性磷酸酶（ ）染色试剂盒、 HX:5’L/’:5\5/- HFI 4EKF 生成抑制因子（ ， ， （ ） 及地塞米松（ ），1^^、转染试 HX:5’D(,X:’\5-5XX -NY:’/0 B,D:’/ ! #8 HP J M\=, ! ! # % ），是含有 个氨基酸残基的肝素结合分泌型 HGO; 3$! 剂阳离子脂质体 （ VL’B5D:,=-5 E5,\5-: #$$$ IYD’ 糖蛋白，其结构与 受体（ ）超家族的成员具 4*; 4*;E aEV），限制性核酸内切酶、 连接酶、