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人腺病毒六邻体蛋白重组及紫草素抗腺病毒作用机制的研究的开题报告

【题目】

人腺病毒六邻体蛋白重组及紫草素抗腺病毒作用机制的研究

【背景】

腺病毒是一种常见的呼吸道病毒，会引起严重的上呼吸道感染、肺炎、腹泻等疾病。特别是婴幼儿和老年人等免疫力较弱的人群容易感染并发症严重。目前已有疫苗和抗病毒药物，但针对不同亚型的腺病毒作用效果各异，且易发生耐药性。

紫草素是一种天然产物，有明显的抗病毒、抗炎、抗肿瘤等作用。而腺病毒六邻体蛋白（hexon）是腺病毒最主要的外壳蛋白，具有广泛的免疫原性和抗原性。

因此，本研究试图利用基因工程技术重组腺病毒六邻体蛋白，并研究紫草素对腺病毒的作用机制。

【研究内容】

1、克隆腺病毒六邻体蛋白基因，构建表达载体，进行原核表达和纯化；

2、将腺病毒六邻体蛋白重组为病毒仿生颗粒（VLPs），并进行体外表征和免疫学检测；

3、建立腺病毒感染小鼠模型和细胞模型，利用免疫荧光和电子显微镜等技术观察VLPs对腺病毒的抑制作用；

4、研究紫草素对腺病毒的抑制作用，并探究其作用机制。

【意义】

本研究可以为腺病毒疫苗和抗病毒药物的研发提供理论和技术支持，同时也可以为紫草素的应用开发提供参考。

【预期结果】

1、成功克隆腺病毒六邻体蛋白基因，得到高效的表达和纯化工艺流程；

2、成功构建腺病毒六邻体蛋白VLPs，进行表征和免疫学检测；

3、证明VLPs对腺病毒具有明显的抑制作用；

4、证明紫草素能够抑制腺病毒的复制，并揭示其抑制机制。

【研究难点】

1、VLPs的构建和表征；

2、小鼠模型的建立和VLPs的抗病毒作用机制研究；

3、紫草素的作用机制研究。

【研究方法】

基因克隆、原核表达和纯化、VLPs构建、体外表征和免疫学检测、小鼠模型和细胞模型构建，光学显微镜、电子显微镜、免疫荧光、ELISA、Westernblot等技术，药物作用机制研究方法。

【实施计划】

时间节点任务

第一年克隆腺病毒六邻体基因，并构建表达载体；初步通过原核表达和纯化工艺流程

第二年优化克隆和表达纯化工艺流程；构建腺病毒感染小鼠模型和细胞模型；构建VLPs并进行体外表征

第三年对VLPs进行免疫学检测并进行抗病毒作用机制研究；研究紫草素对腺病毒的抑制作用及其作用机制

第四年综合分析各项实验结果，并进行论文撰写和发表；完成材料的整理和答辩

【研究经费】

经费预算包括仪器设备购置费和试剂耗材费，总经费为100万元。其中仪器设备购置费为50万元，试剂耗材费为50万元。