文档详情

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上 ....doc

发布：2017-05-05约2.12万字共17页下载文档

文本预览下载声明

Western Blot详解Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:一、原理二、分类i.放射自显影ii.底物化学发光ECLiii.底物荧光ECFiv.底物DAB呈色三、主要试剂四、主要步骤五、实验常见的问题指南1.参考书推荐2.针对样品的常见问题3.抗体4.滤纸、胶和膜的问题5.Marker的相关疑问6.染色的选择7.参照的疑问8.缓冲液配方的常

显示全部

相似文档

Western免疫印迹（WesternBlot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用.doc Western Blot详解Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:一、原理二、分类i.放射自显影ii.底物化学发光ECLiii.底物荧光ECFiv.底物DAB呈色三、主要试剂四、主要步骤五、实验常见的问题指南1.参考书推荐2.针对样品的常见问题3.抗体4.滤纸、胶和膜的问题5.Marker的相关疑问6.染色的选择7.参照的疑问8.缓冲液配方的常
2017-03-15 约2.12万字 17页立即下载
蛋白质印迹法-Western-Blot技术详解.ppt Western blot 实验技术 2012.12.12 Western blot的定义 Western blot的基本原理 Western blot的一般流程 Western blot的常见问题定义印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 Western blot又成蛋白质印迹法，对单项电泳后蛋白质分子的印迹分析称western印迹法，它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,且能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。基本原理 West
2017-05-25 约3.38千字 22页立即下载
Western Blot 蛋白印迹法 (新手).doc Western Blot 蛋白印迹法－－详细中文操作指南（新手适用） ? 这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。仪器：高压锅、玻璃匀浆器、高速离心机、分光光度仪、—20℃低温冰箱、垂直板电泳转移装置、恒温水浴摇床、多用脱色摇床。试剂：单去污剂裂解液、0.01mol/L PBS (pH7.3)、10％分离胶、4％浓缩校、G250考马斯亮蓝溶液、0.
2018-06-17 约9.4千字 12页立即下载
蛋白质免疫印迹技术.ppt 实验二蛋白质免疫印迹技术;一、免疫学;免疫学的讨论范围很广，与很多相关学科交织在一起，并且进展成了很多学科，如免疫生物学、免疫遗传学、血液免疫学、肿瘤免疫学等。随着免疫生物学的进展，人们发现在高等动物体内存在着具有免疫功能的组织结构（即免疫系统）。; ;免疫系统功能的生理和病理表现;当外源异体物质，如细菌、病毒、蛋白质、多糖等进入动物机体后，可以激活机体免疫系统，产生对外源物质的排解作用，从而保护机体免受外源物质的侵害。机体的这一特异免疫应答功能的细胞基础是淋巴细胞。; ;抗原和免疫原性;抗原的分类;抗体的种类;;抗原抗体反应（antigen-antibody reaction）是指抗
2023-08-28 约4.5千字 62页立即下载
蛋白质免疫印迹技术.解读.ppt 转移电泳设备 Western－blotting 检测抗血清转膜膜的选择尼龙膜硝酸纤维素膜封闭非特异性抗体结合麻烦简单快速封闭非特异性抗体结合价格昂贵价格便宜特殊要求下的选择需要更高的蛋白结合率（尼龙膜： 480μg/cm2 ；硝酸纤维素膜：80μg/cm2 ）目的蛋白与硝酸纤维膜的结合能力弱需要更大的机械强度转膜半干法将凝胶和固相基质象三明治一样加在用缓冲液湿润滤纸之间，电转10－30min。湿法将凝胶和固相基质夹在滤纸中间，浸泡在转移装置的缓冲液中，电转45min或过夜。封闭脱脂奶粉（5％） BSA Western Blot
2016-11-01 约7.51千字 62页立即下载
蛋白质免疫印迹技术及.解读.ppt 张绍进 蛋白质免疫印迹技术及常见问题分析 Western Blot简介 Western Blot一般流程 Western Blot常见问题分析 Western Blot 简介：印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对
2016-11-05 约1.22万字 42页立即下载
蛋白质免疫印迹实验.ppt 关于蛋白质免疫印迹实验一实验原理WesternBlotting是用来检测蛋白质的一种技术。首先将含有待测蛋白的蛋白质混合物进行凝胶电泳分离，然后将已经分离的蛋白质通过电泳技术从凝胶转移到固体支持物上，这一固体支持物目前常为硝酸纤维素薄膜。随后以待测蛋白质上抗原决定簇特异性的抗体（称为第一抗体）为探针，与固体支持物上的蛋白质进行免疫反应，最后用偶联有辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶的抗第一抗体的抗体（第二抗体）与第一抗体进行免疫反应，只有与第一抗体特异性结合的待测蛋白才能与第二抗体发生免疫反应。在有辣根过氧化物酶的底物用显色剂存在时就会出现颜色反应，结合有第一抗体、第二抗体的待测蛋白，通过颜色反应即
2024-04-06 约2.19千字 11页立即下载
实验七蛋白质免疫印迹实验.pdf 实验七 蛋白质免疫印迹实验〔WesternBlotting〕精选ppt 一实验原理 nWesternBlotting是用来检测蛋白质的一种技术。 n首先将含有待测蛋白的蛋白质混合物进行凝胶电泳别离，然后将已经别离的蛋白质通过电泳技术从凝胶转移到固体支持物上，这一固体支持物目前常为硝酸纤维素薄膜。随后以待测蛋白质上抗原决定簇特异性的抗体〔称为第一抗体〕为探针，与固体支持物上的蛋白质进行免疫反响，最后用偶联有辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶的抗第一抗体的抗体〔第二抗体〕与第一抗体进行免疫反响，只有与第一抗体特异性结合的待测蛋白才能与第二抗体发生免疫反响。在有辣根过氧化物酶的底物用显
2024-10-12 约3.57千字 11页立即下载
蛋白质免疫印迹技术详解.ppt 蛋白质免疫印迹检测技术一、实验目的二、实验原理三、实验仪器四、操作步骤五、实验结果与分析六、思考题 ? 一、实验目的学习掌握动物抗血清的制备原理及技术通过实际操作学会动物抗血清的制备掌握Western－blotting的基本原理??? 熟悉Western－blotting的实验操作? 二、实验原理第一部分动物的常规免疫及抗血清的制备第二部分 Western－blotting 检测抗血清将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间，动物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清称为免疫血清。优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫原性，以及动物应答的能
2017-05-21 约6.01千字 62页立即下载
【2017年整理】Western Blot(免疫印迹法).docx Western Blot(免疫印迹法) 主要包括以下4个基本步骤：样品制备电泳分离蛋白的膜转移 免疫杂交与显色――蛋白检测溶液和试剂 1X 磷酸盐缓冲液(PBS) Modified RIPA buffer Tris-HCl: 50 mM, pH 7.4 ; NP-40: 1% ;Na-deoxycholate: 0.25% ;NaCl: 150 mM ;EDTA: 1 mM ;PMSF: 1 mM ;Aprotinin, leupeptin, pepstatin: 1 microgram/ml each ;Na3VO4: 1 mM ;NaF: 1 mM 1X SDS 样品缓冲
2017-01-18 约字 19页立即下载
Western blot(蛋白印迹法)详细步骤.doc Western blot（蛋白印迹法）详细步骤组织的研磨准备：研钵、研磨棒、EP管、药匙、液氮、液氮匙、自封袋、一次性手套、棉手套步骤：①用研磨棒将装有冻存组织的EP管敲碎，取出组织，在研钵中盛满液氮，用力敲碎组织，研磨。 ②研磨过程中一旦液氮干了，立即加入液氮，保持研磨在液氮中进行，直至组织呈干粉状。 ③用在液氮中浸泡过的药匙将研磨好的粉末盛入新的EP管中。 ④装有组织粉末的EP管现在液氮中保存，待所有组织都研磨结束后装入自封袋，于-80℃保存。注意：1.研钵使用前要用锡纸包口、研磨棒用锡纸包头，在烘箱中烘烤180℃至少3h以上。 2.
2018-09-24 约4.63千字 5页立即下载
蛋白质免疫印迹技术实验研究与进展.docx 蛋白质免疫印迹技术实验研究与进展目录一、内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3 1.1蛋白质免疫印迹技术概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4 1.2蛋白质免疫印迹技术研究意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6 1.3蛋白质免疫印迹技术发展历程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7 二、蛋白质免疫印迹技术原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9 2.1蛋白质样品制备方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．
2025-05-14 约3.44万字 57页立即下载
【2017年整理】蛋白质免疫印迹技术.ppt 实验二蛋白质免疫印迹技术;一、免疫学;免疫学的研究范围很广，与很多相关学科交织在一起，并且发展成了很多学科，如免疫生物学、免疫遗传学、血液免疫学、肿瘤免疫学等。随着免疫生物学的发展，人们发现在高等动物体内存在着具有免疫功能的组织结构（即免疫系统）。; ;免疫系统功能的生理和病理表现;当外源异体物质，如细菌、病毒、蛋白质、多糖等进入动物机体后，可以激活机体免疫系统，产生对外源物质的排除作用，从而保护机体免受外源物质的侵害。机体的这一特异免疫应答功能的细胞基础是淋巴细胞。; ;抗原和免疫原性;抗原的分类;抗体的种类;;抗原抗体反应（antigen-antibody reaction）是指抗
2017-06-10 约2.3千字 62页立即下载
电泳分离蛋白质与蛋白质免疫印迹.ppt 关于电泳分离蛋白质与蛋白质免疫印迹第1页，共28页，星期日，2025年，2月5日蛋白免疫印迹杂交（WesternBlot）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB是进行蛋白质分析最流行和成熟的技术之一。第2页，共28页，星期日，2025年，2月5日原理聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂N，N，N?，N?—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(P
2025-04-10 约3.71千字 28页立即下载
Western blotting全新革命-整套创新的蛋白质印迹工作流程解决方案-CN.pdf Western blotting全新革命一整套创新的蛋白质印迹工作流程解决方案蛋白质印迹工作流程分离转印检测分离、转印、检测忘记过去的失败。现在您可以提升蛋白质印迹数据的质量，同时减少实验时间和精力。针对蛋白质印迹工作流程的三个步骤，我们可提供高性能的工具和技术，使Western实验流程变得快速、简单。现在开始，您只需一上午的时间，即可获得可供发表的高质量蛋白印迹结果。分离(35 min)
2017-02-27 约字 16页立即下载