高效液相色谱检测技术.docx

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吡虫啉免疫亲和柱净化高效液相色谱检测技术

1范围

本标准规定了吡虫啉农药残留的免疫亲和层析净化高效液相色谱检测技术的原理、试剂与材料、仪器与设备、试样制备、测定、结果计算与表述和重复性。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB2763-2019食品安全国家标准食品中农药最大残留限量NY/T789-2004农药残留分析样本的采样方法

3原理

试样经过甲醇-水提取后，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有吡虫啉特异性抗体的免疫亲和层析柱层析净化，经高效液相色谱仪分离、检测后，测定试样中吡虫啉的含量。

4试剂与材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯；实验室用水符合GB/T6682中规定的二级水，标准溶液和流动相用水为一级水。

4.1甲醇：色谱纯

4.2苯：色谱纯

4.3乙腈：色谱纯

5仪器与设备

实验室常规仪器、设备、材料及下列各项。

5.1吡虫啉免疫亲和柱，柱容量≥300ng。

5.2普通化学滤纸

5.3容量瓶

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5.4高效液相色谱仪

6试样制备

6.1提取

取试样可食部分，切碎后，称取10g±0.01g，加入5mL甲醇-水（70:30）溶液涡旋5min，静置30min。随后将样品溶液在滤纸上进行固液分离。滤液转移至10mL容量瓶并定容至10mL（样品处理液冲洗滤纸中的样品）。样品滤液由稀释液进行5倍稀释，待检测用。

6.2净化

将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃定量管下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃定量管中，将空气压力泵与玻璃定量管连接，调节压力使溶液以不超过2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，待溶液全部流出后，以10.0mL纯水清洗柱子2次，弃去全部流出液。准确加入1.0mL甲醇洗脱，流速不超过1mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，加纯水定容为2.0mL，供色谱检测用。

7测定

7.1色谱条件

色谱柱：SB-C18柱，4.6×250mm；流动相：甲醇+水（15:85）溶液

流速：1.0mL/min

检测波长：紫外波长270nm

柱温：室温

进样量：20μL7.2色谱测定

分别取相同体积样液和标准工作溶液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰高或峰面积）。经过与吡虫啉标准溶液谱图比较响应值得到试样中吡虫啉的浓度。

8结果计算与表述

试样中吡虫啉含量以质量分数X计，单位为微克每千克(μg/kg），按式（1）计算：

（1）

式中：

Pi：试样溶液中吡虫啉组分的峰面积值；

Vi：样品的总稀释体积，单位为毫升（mL）；

Ci：吡虫啉标准溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

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Vs：标准溶液的检测体积（mL）;

Ps：吡虫啉标准溶液面积平均值（系列浓度）；M：试样质量，单位为克（g）。

测定结果用平行测定的算术平均值表示，计算结果表示到小数点后一位。

9重复性

在重复实验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%。