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生物技术进展

生物技术进展2023年第13卷第4期637~644CurrentBiotechnologyISSN2095?2341

TechniquesandMethods

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应用高压冷冻-冷冻替代技术研究Erastin对颗粒细胞超微结构的影响

王珍1，黄克让1，陈蕾1，周敏1，薛元夏2

1.西北农林科技大学，生命科学大型仪器共享平台，陕西杨凌712100；2.杨凌职业技术学院生物工程学院，陕西杨凌712100

摘要：为了探究铁死亡对颗粒细胞超微结构的影响，采用高压冷冻-冷冻替代法(highpressurefreezing-freezingsubstitution，HPF-FS)和常规化学固定法(chemicalfixation,CF)对Erastin诱导处理的牛颗粒细胞和猪颗粒细胞超微结构进行研究。结果发现，与对照组相比，经Erastin诱导处理48h的牛颗粒细胞和猪颗粒细胞的增殖受到显著抑制，ATP含量显著降低，ROS水平显著升高，指示颗粒细胞出现了铁死亡；电镜观察发现两个处理组的细胞均出现空泡化，线粒体变小，嵴断裂甚至消失，且对照组猪颗粒细胞的内质网比处理组的结构更丰富。与CF处理相比，HPF-FS技术对细胞超微结构的保存具有显著优势，胞质均匀、细胞膜界限清晰，线粒体、高尔基复合体、自噬泡、细胞核等结构清晰完整，更加接近于细胞瞬时生理状态。结果表明，利用HPF-FS技术能更加真实、全面地展现细胞的超微结构，为进一步研究颗粒细胞的凋亡调控机制及介导卵泡发育等相关研究提供参考。

关键词：铁死亡；Erastin；高压冷冻-冷冻替代；超微结构；颗粒细胞DOI：10.19586/j.2095?2341.2023.0057

中图分类号：Q-336文献标志码：A

EffectofErastinontheUltrastructureofGranularCellsbyHighPressureFreezing-freezingSubstitutionTechnology

WANGZhen1，HUANGKerang1，CHENLei1，ZHOUMin1，XUEYuanxia21.LifeScienceResearchCoreServices，NorthwestAFUniversity，ShaanxiYangling712100，China；

2.CollegeofBiologicalEngineering，YanglingVocationalTechnicalCollege，ShaanxiYangling712100，China

Abstract：Inordertoinvestigatetheeffectofferroptosisontheultrastructureofgranulosacells，thehighpressurefreezing-freez?ingsubstitutionmethod（HPF-FS）andconventionalchemicalfixationmethod（CF）wereusedtostudytheultrastructuresofbo?vineandporcinegranulosacellsinducedbyErastin.Theresultsshowedthat，afterinductionbyErastinfor48h，theprolifera?tionofbothbovinegranulosacellsandporcinegranulosacellsweresignificantlyinhibited，theATPcontentsweresignificantlydecreased，andtheROSlevelsweresignificantlyincreasedwhencomparedwiththecontrolgroup，alloftheseindicatedferropto?sisingranulosacells.Electronmicroscopyobservationindicated