生物技术药物研究进展-培训课件.ppt

表 7. 临床试验中的反义寡核苷酸 (六)RNA干扰剂 内源或外源的双链RNA导入细胞后，介导序列特异的转录后基因沉默，从而抑制靶基因的表达称为RNA干扰(RNAi)。 对靶基因mRNA有特异降解作用的小干扰RNA(siRNA)定义为RNA干扰剂。 A.RNAi特点： 1.RNAi是转录后水平的基因沉默 2.具有很高特异性：特异降解与之序列对应的单个内源基因 mRNA。 3. RNAi抑制基因具高效性：极少量dsRNA能完全抑制相应基因 表达。 4. RNAi具一定传递效应。 B. siRNA和反义药物区别： siRNA是双链结构，反义药物为单链。 2. siRNA必须在相关协同因子和核酸酶、RNA依赖性RNA聚合酶、解旋酶、激酶等存在下才能介导降解靶 mRNA。 3. siRNA自身无催化作用。 4. siRNA在细胞相对稳定。 5. siRNA介导的RNAi效应有遗传性(晡乳动物细胞尚未发现)。 6. siRNA能特异识别具单一点突变的靶RNA序列。 和单链反义寡核苷酸、核酶及脱氧核酶比较，siRNA具高特异和高效性，抑制基因表达更为理想。 C. RNA干扰的应用： 1.用于研究基因功能。 2.用于基因敲除。 3.进行基因表达调控研究。 4. 抗病毒和抗肿瘤：已有深入研究。用于进行肿瘤基因治疗。 (六). 基因治疗： 基因治疗简而言之是用基因治疗疾病，以往主要针对遗传性单基因缺陷型疾病。1990年美国国立卫生研究院(NIH)的Blase和Anderson采用ADA(腺苷酸脱氨酶)基因治愈了一个由于ADA基因缺陷导致的严重免疫缺损4岁女孩，从而在世界范围使基因治疗受到关注。近年来，已从单基因遗传病扩大到多基因疾病，如肿瘤，心脑血管疾病，神经系统疾病、自身免疫疾病、艾滋病及内分泌疾病等。方法分为性细胞基因治疗和体细胞基因治疗，目前临床试验的均为体细胞治疗，至1996年底已有1537例患者接受这一疗法，表明体细胞基因治疗具有较好操作性，但其缺点在于并没有改变病人已有单个或多个基因缺陷的遗传背景，以致后代必然会发生该病的遗传。性细胞基因治疗是在患者的性细胞中进行操作，使后代不会再遗传这种疾病，目前技术难点在于基因定点整合(基因打靶)，且志愿接受治疗者少，因此未进入临床研究。 外源基因只有整合至染色体中，成为其一部份才能获持续高效表达，因此，要选择合适载体，使外源基因进入胞核与染色体整合，目前主要采用腺病毒(AV)及腺相关病毒(AVV)等作为载体。当前大部分基因治疗均是从病人体内获得某种细胞(如T淋巴细胞)，体外培养并进行基因转移，再重新输入患者体内，这称之为体外(in vitro)基因治疗，此外科学家正致力于进行体内(in vivo)基因疗法，如1994年美国科学家以经修饰的腺病毒为载体，成功将治疗遗传性纤维化病的正常基因cfdr转入患者肺组织中，这种直接向人体细胞中转移的方法为体内基因治疗。 目前为止，基因治疗均处于初期临床试验阶段，尚无稳定疗效和完全安全性，1999年美国一个18岁患有鸟氨酸转氨甲酰酶不足症的遗传病患者，在美国宾夕法尼亚大学人类基因治疗中心进行基因治疗时不幸死亡，这是死于基因治疗的首例患者，因此增强基因治疗安全性，提高临床试验的严密，合理性尤为重要。 经过十多年努力，基因治疗发展趋势令人鼓舞，至1998年为止，世界范围已有373个临床方案被实施，累积3134人接受了基因转移试验。 我国基因治疗与国际基本同步开展，其中p53重组腺病毒注射液已在国际首次上市，用于肿瘤基因治疗。B型血友病与脑瘤的基因治疗已进入临床研究，但规模小。 鉴于许多严重疾病难以用常规手段治疗，因此人们对基因治疗有极高期望值，因此国际上对基因治疗研究投入有增无减，据了解1994年总投入为6700万美元，1995年为1亿美元，1996年达1.6亿美元，1997年增至1.81亿美元，而1998年上半年已投入1.19亿美元，基因治疗对重大疾病治疗有潜在应用前景，因此市场前景光明。 将人或哺乳动物的特定基因导入哺乳动物受精卵，导入基因若能与受精卵染色体DNA整合，当细胞分裂时染色体倍增，基因随之倍增，从而使每个细胞都带有导入的基因且能稳定遗传，这种新个体称之为转基因动物，基因表达的最理想动物部位为乳腺，因为乳腺不进入体内循环，不会影响转基因动物的生理过程，且从乳汁提取基因表达产物量高，易提纯并己进行过必要修饰加工，具有生物活性，因此转基因动物可以称之为“动物乳腺生物反应器” 以转基因动物生产目的产物成本低、周期短，如以动物细胞生产1克蛋白成本需800—5000美元，而转基因动物生产成本为0.02—0.5美元；一般药品开发周期为10—15年，而转基因羊为18个月，转基因牛