医学实验动物学详解.ppt

* * * * * * * 下颌骨测量法：从动物群体中随机取出若干60日龄以上的成年鼠，小心剪下头部，煮沸2-3分钟以上，加入蛋白水解酶，37 ℃恒温保持过夜，剔除残余肌肉，除去切齿，仔细分辨出右下颌骨，加以标记，将下颌骨放置在特制的标准座标纸下，在解剖镜下测量11个参数，然后将所获得的各点数据统计处理，求出判别函数后加以区别。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * (三)性连锁免疫缺陷小鼠 (XID) B淋巴细胞缺陷,xid基因位于X性染色体上 起源于CBA/N品系 临床表现:免疫球蛋白缺失,无丙种球蛋白,细胞免疫正常,体液免疫异常 血清中IgM,IgG3底下 xid/xid♀,xid/Y♂对II型抗原无体液免疫反应,对B细胞分裂素缺乏反应 应用 B淋巴细胞的发生,功能与异质性理想模型 病理与人类Bruton丙球蛋白缺乏症和Wzeskott-Aidsch综合症相似 (四) Beige小鼠 NK细胞活性缺陷 隐性突变基因bg位于第13号染色体上 纯合体小鼠bg/bg:被毛完整,毛色变浅.粒细胞趋化性和杀菌活性降低,溶酶体功能缺陷,对各种病原因子较敏感 繁殖方式:纯合子 (五)严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠 C.B-17近交系小鼠 隐性突变基因scid在16号染色体上. T,B细胞大大减少.临床表现为低球蛋白血症,低淋巴细胞血症. 细胞和体液免疫功能均缺失,但巨噬细胞和NK细胞功能未受影响. 有渗漏现象:主要与DNA修复,抗原刺激,年龄品系,饲养环境有关. 饲养繁殖:SPF环境,两性均可生育,每胎产子3~5只 应用 免疫细胞分化和功能研究 异种免疫功能重建 人类自身免疫性疾病及免疫缺陷性疾病 病毒学 肿瘤学 人单克隆抗体生产 (六)猴获得性免疫缺陷综合症模型(SAIDS) 免疫学特征:体液和细胞免疫功能降低,淋巴细胞减少,循环性T淋巴中T4和T8的比例明显低于正常 临床表现到病原学与人类AIDS很相似:全身淋巴腺病,反复腹泻,消瘦等. 应用:AIDS预防,治疗和控制等研究的重要模型 三,人体肿瘤裸鼠移植瘤模型 1、人体肿瘤异种移植的历史回顾 克服排斥:1移植特殊部位 2、免疫抑制、辐射 3、免疫器官切除 裸鼠的培育： 2、模型建立方法 （1）???? 移植肿瘤的常规处理及移植方法 组织块移植法 悬液移植法 培养细胞移植法 （2） 不同移植途径及方法 a 腹水瘤的建立及移植方法 b 肾包膜下移植 c 原位移植 （3）移植瘤的长期冷冻保存 3、影响移植成功的因素 （1) 人体肿瘤细胞本身特征 （2)? 裸鼠免疫功能状态 （3) 裸鼠背景 （4) 移植部位和途经 （5) 激素和宿主性别 （6) 鼠龄 （7） 裸鼠的健康状况及洁净状况 （8）其它因素 4.人体肿瘤裸鼠移植瘤的生物学特性 （1）组织学特征及性状的稳定性 形态学特征、染色体 (2)裸鼠对移植瘤的反应 （1)组织学特征及性状的稳定性 形态学特征、染色体 活性物质及表面抗原：【1】 甲胎蛋白（TFP）及HbsAg 【2】癌胚抗原CEA 【3】白细胞刺激因子CSF 【4】红细胞生成素 EPO 【5】激素 【6】酶及其它 基因型及表型的稳定性 (2)裸鼠对移植瘤的反应 【1】???上皮样肿瘤：移植后大多数不同程度地丧失原有间质,而获得小鼠间质 【2】???? 来源于裸鼠的间质细胞可以恶变 【3】??????分化程度差别及化生 第十章 实验动物胚胎工程 胚胎工程 转基因动物 基因敲除动物 ENU诱变小鼠 第一节 胚胎工程 一、胚胎工程基本内容 超数排卵，胚胎培养，胚胎保存，胚胎移植，胚胎分割，体外受精，显微受精，细胞核移植，卵的激活与孤雌发育，胚胎干细胞。 二、胚胎冷冻库建立及试管动物培养。 1.超数排卵 (1)常用激素 PMSG HCG FSH LH (2)超排方法 第一天腹腔注射PMSG 第三或第四天腹腔注射HCG (3)剂量:小鼠5~20IU 兔30~60IU (4)影响因素:动物,激素生物活性,发情期,气候季节 第二节 转基因动物 一、概述、 1、转基因动物：染色体基因组中整合有外源基因并能遗传给后代的一种动物。 2.转基因动物模型:利用转基因技术,将人类疾病基因分离出来,再转移到实验动物,获得相应疾病的动物模型. 3、基本原理和方法： 显微注射法，反转录病毒法