脐带血造血干细胞分离冻存方法优化 - 重庆理工大学学报.PDF

第２８卷　第１２期 重 庆 理 工 大 学 学报（自然科学） ２０１４年１２月 Ｖｏｌ．２８　　Ｎｏ．１２ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｄｅｃ．２０１４  ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－８４２５（ｚ）．２０１４．１２．０１６ 脐带血造血干细胞分离冻存方法优化 陈　林，张　坤，邵文陶，杨　珂，陈禄华 （重庆市干细胞企业工程研究中心，重庆　４０１３２０） 摘　　　要：探讨了不同分离方法和冻存方法对脐带血造血干细胞的分离和保存效果的差异。 对比了离心沉降法和自然沉降法分离效果，以及ＤＭＳＯ和氯化钠混合液，ＤＭＳＯ和右旋糖酐混 合液，ＤＭＳＯ和羟乙基淀粉混合液，ＤＭＳＯ、胎牛血清和Ｆ１２培养基混合液等４种冷冻保护剂效 果，并对冻存后细胞复苏进行有核细胞计数、台盼蓝染色、流式细胞术、细胞集落培养等检测。 通过检测结果筛选了最佳冻存方法，同时研究了冻存时间对脐带血造血干细胞的影响。结果表 明：离心沉降法效果最好且效率高；ＤＭＳＯ和羟乙基淀粉混合液冻存效果最佳且成本更低；脐带 血造血干细胞冻存１２个月内细胞各方面差异不明显。 关　键　词：脐带血造血干细胞；冻存；二甲基亚砜；羟乙基淀粉；流式细胞术；细胞集落 中图分类号：Ｑ２　　　　文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４－８４２５（２０１４）１２－００８２－０５ ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＣｏｒｄＢｌｏｏｄＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＣｅｌｌｓＩｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄＣｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄ ＣＨＥＮＬｉｎ，ＺＨＡＮＧＫｕｎ，ＳＨＡＯＷｅｎＴａｏ，ＹＡＮＧＫｅ，ＣＨＥＮＬｕｈｕａ （ＳｔｅｍＣｅｌｌＥｎｔｅｒｐｒｉｓｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０１３２０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｓｈｏｗｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓｏｆｃｏｒｄｂｌｏｏｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｓｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｄｅｎｓｉｔｙｇｒａｄｉｅｎｔｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｎａｔｕｒａｌｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｗｅａｌｓｏｃｏｍｐａｒｅｄｔｈｅｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｘｅｄｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆ ｓｏｄｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅａｎｄｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ（ＤＭＳＯ），ｔｈｅｍｉｘｅｄｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆＤＭＳＯａｎｄｄｅｘｔｒａｎ，ｔｈｅｍｉｘｅｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆＤＭＳＯａｎｄｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｓｔａｒｃｈ，ｔｈｅｍｉｘｅｄｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆＤＭＳＯａｎｄＦｅｔａｌＢｏｖｉｎｅＳｅｒｕｍａｎｄ Ｆ１２ｍｅｄｉｕｍａｎｄｓｏｏｎ．Ｐｏｓｔｔｈａｗｅｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｍｅａｎｓｏｆｔｒｙｐａｎｂｌｕｅｄｙｅｅｘｃｌｕｓｉｏｎｔｅｓｔ， ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｎａｌｙｓｉｓ，ｃｅｌｌｓｃｏｌｏｎｙａｓｓａｙｔｏｆｉｎｄｔｈｅｂｅｓｔｃｅｌｌｆｒｅｅｚｉｎｇｍｅｄｉｕｍａｎｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔ ｏｆｃｏｒｄｂｌｏｏｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｓｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｆｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｄｅｎｓｉｔｙｇｒａ ｄｉｅｎｔｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎｉｓｔｈｅｂｅｓｔｉｓｏｌａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｂｅｓｔｆｒｅｅｚｉｎｇｍｅｄｉｕｍｏｆｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄｂｌｏｏｄ ｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｓｔｈｅｍｉｘｅｄｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆＤＭＳＯａｎｄｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｓｔａｒｃｈ．Ｔｈｅｒｅｉｓｎｏｏｂｖｉｏｕｓｄｉ