整合WSSV囊膜蛋白VP37的假型HIV病毒的构建与功能研究的中期报告.docx

整合WSSV囊膜蛋白VP37的假型HIV病毒的构建与功能研究的中期报告 一、研究背景 白斑对虾（Penaeus vannamei）是海水养殖业中重要的养殖虾种之一，而白斑对虾白斑病毒（WSSV）是其最主要的病原体。WSSV属于Baculoviridae科、Nucleopolyhedrovirus属，病毒颗粒呈为六边形或圆形，包裹在外壳蛋白（VP26和VP28）和囊膜蛋白（VP19、VP24和VP15）构成的三层外壳中。VP37是WSSV的一种关键的囊膜蛋白，其扮演着在WSSV感染过程中的重要角色，对WSSV的复制和传播起到了关键性的影响。因此，VP37具有成为开发WSSV病毒疫苗的潜力。 而人类免疫缺陷病毒（HIV）则属于 Retroviridae科、Lentivirus属，是一种致命的病毒，已经成为全球公共卫生领域的主要问题之一。现有的HIV治疗手段主要为抑制病毒复制的抗逆转录病毒药物，但该治疗方案的问题在于对病毒的抑制并不能真正从根本上治愈感染者。因此，开发HIV病毒疫苗一直是全球生物医药领域一项重要的研究工作。 二、研究目的 本研究旨在探索利用VP37搭载HIV抗原成为一种新策略，构建WSSV携带假型HIV病毒，并研究其效果。 三、材料与方法 1.实验材料 本研究所使用的白斑对虾（Penaeus vannamei）来源于海水养殖场。开发VP37携带HIV抗原的假型HIV病毒并将其构建进WSSV中，再利用Western blot和ELISA等分析手段对其进行功能分析。 2.实验方法 （1）构建假型HIV病毒 从HIV感染者血浆中提取HIV病毒RNA，通过RT-PCR方法扩增出病毒RNA中的长链DNA模板，利用PCR特异性引物扩增出包含HIV gag基因的DNA段和包含VP37基因的DNA段，将两个DNA段连接起来，构建出包含HIV gag基因的VP37表达载体。 （2）构建WSSV假型病毒 将VP37表达载体植入WSSV病毒低毒菌株DNA中，使WSSV病毒拥有携带HIV gag基因的假型病毒，命名为VP37-WSSV。 （3）Western blot分析 将VP37-WSSV感染白斑对虾，抽取虾肝组织，进行蛋白质电泳和Western blot分析，检测HIV gag基因在虾体内的表达情况。 （4）ELISA分析 用ELISA技术检测感染了VP37-WSSV的白斑对虾体内的HIV抗体水平，以及对HIV的免疫保护作用。 四、预期结果 本研究预期探索出一种新的开发病毒疫苗的方法，可以成功地将HIV抗原搭载到VP37囊膜蛋白上，并且构建出VP37-WSSV，这种虾病毒能够成功感染白斑对虾，同时在虾体内表达HIV gag蛋白。ELISA结果预期表明，VP37-WSSV具有一定的免疫保护效果，这也为开发无害病毒疫苗提供了一种新的思路和方法。