HIV_1包膜蛋白gp41优势抗原的构建及可溶性表达.pdf

生 物 技 术 通 讯 764 LETTERS IN BIOTECHNOLOGY Vol．22 No．6 Nov．, 2011 doi: 10．3969 ／ j．issn．1009－0002．2011．06．003 研究报告 HIV－1 包膜蛋白gp41 优势抗原的构建及可溶性表达 1 2 1 1 1 杜刚 ，江蒙蒙 ，尹林 ，王宏萍 ，周晓明 1． 上海市公共卫生临床中心，上海 201508 ； 2． 苏州大学 基础医学院，江苏 苏州 215006 ［摘要］ 目的：筛选 型人免疫缺陷病毒（ ）中国流行株中包膜蛋白 的优势抗原片段，构建具有区域流行 1 HIV－1 gp41 代表性的HIV－1 gp41 重组抗原，为改进现有HIV－1 初筛试剂盒中使用的同类抗原奠定基础。 方法：利用免疫斑点 杂交和生物信息学方法，从收集自重庆、广州、上海的区域代表性 150 份HIV－1 感染者血清标本中筛选gp41 抗原性 强的候选样本， 利用RT－PCR 及巢式PCR 方法扩增包含重要抗原表位决定蔟的gp41 基因片段， 与原核表达载体 pQE30 连接，转化大肠杆菌 M15 构建gp41 重组抗原表达菌株，表达后经亲和层析纯化、SDS－PAGE 和Western 印迹 鉴定。 结果：兔源HRP 标记的gp41 多抗能识别标本中gp41 抗原性差异，得到候选样本，扩增包含gp41 主要抗原表 位片段；构建了包含gp41 抗原表达簇的重组原核表达质粒，表达、纯化后经His 标签抗体Western 印迹鉴定为阳性。 结论：高纯度的重组优势gp41 抗原的构建和鉴定，为进一步改进现有HIV 初筛诊断奠定了基础。 ［关键词］ 1 型人免疫缺陷病毒；包膜蛋白gp41 ；抗原表位；斑点杂交；亲和层析 ［中图分类号］ R392．1; Q78 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1009－0002(2011)06－0764－05 Construction and Prokaryotic Expression of Soluble HIV －1 gp41 Dominant Epitopes 1 2 1 1 1 DU Gang , JIANG Meng－Meng , YIN Lin , WANG Hong－Ping , ZHOU Xiao－Ming 1． Shanghai Public Health Clinical Center Affiliated to Fudan University, Shanghai 201508; 2． Basic Medicine Department, Soochow University, Suzhou 215006; China ［Abstract ］ Objective: To prepare the major antigen fragment of gp41 of HIV－1 based on main epidemic strains in China and to construct representative gp41 recombinant antigen of HIV－1 for further improving the efficacy of current HIV screening test．