第一章1-6噬菌体载体.pdf

第一章 3、λ噬菌体载体的优缺点： 第一章 分子克隆的工具酶和载体 • 优点：包装的λ噬菌体感染大肠杆菌要比 分子克隆的工具酶和载体 质粒转化细菌的效率高。 • 缺点：λ噬菌体载体的克隆操作要比质粒 • 第八节 噬菌体载体 • 第八节 噬菌体载体 载体复杂。 • 一、 λ噬菌体 • 一、 λ噬菌体 • 用途：λ噬菌体载体比质粒载体能插入的 • （一）λ噬菌体 DNA长得多，常用于构建cDNA文库或基因 • （一）λ噬菌体 • （二）λ噬菌体载体的改造 组文库。 • （二）λ噬菌体载体的改造 • （三）λ噬菌体载体举例 Lambda gt10 Lambda gt10 （三）λ噬菌体载体举例 概述： • Lambda gt10是一种插入载体。 • Lambda gt10 • Lambda gt10 • 在噬菌体阻遏基因cI 内有单一的EcoR Ⅰ克隆 • Lambda gt11 • Lambda gt11 位点。用于插入小的cDNA片段(约6kb)，构 • EMBL3和EMBL4 建cDNA文库或基因文库。 • 该载体克隆效率很高。 • 在构建cDNA文库时，利用Oligo(dT)或随机 引物合成的cDNA经过EcoR Ⅰadaptors或 Linkers修饰后，就可以和λgt10连接起来。 • 克隆到λgt10的噬菌体，可用核酸探针进行筛 选。 10 Lambda gt 10 map Lambda gt map 宿主： • 建议用C600 and C600hf1作受体菌。 筛选： • 如果有外源DNA插入，cI基因失活，该噬 菌体进入裂解生长途径，在培养皿形成噬 菌斑。反之，若无插入，cI基因表达，噬 菌体进