无花果蛋白酶不同提取方法比较及酶学性质研究.doc

无花果蛋白酶不同提取方法比较及酶学性质研究 　　摘要：以无花果叶为原料，对乙醇沉淀、单宁沉淀和盐析沉淀３种方法提取的无花果蛋白酶进行了比较。结果表明，乙醇沉淀法操作简单，提取的无花果蛋白酶易分离纯化，比酶活最高，蛋白酶的回收率达 ４７．９９％，总纯化系数为２．０５。无花果蛋白酶反应的最适温度为６５℃，最适ｐＨ值为７．０，当ｐＨ值为６．５和８．５时酶活性稳定，Ｋｍ值约为０．６５６ ０ ｇ／Ｌ。 　　关键词：无花果叶；无花果蛋白酶；乙醇法；单宁法；盐析法；酶学性质 　　中图分类号：Ｓ６６３．３；Ｑ８１４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）06－1258-03 　　 　　Study on Comparison of Extraction Methods of Ficin and Enzymatic Characterization 　　ＧＵＯ Ｄｏｎｇ－ｑｉｎｇ１，ＪＩ Ｆｕ－ｊｉａｎｇ１，ＧAO Ｊｉａｎ１，ＺHOU Ｙａｎ－ｘｉａ１，ＳＯＮＧ Ｓｈｕ－ｌｉａｎｇ３，ＪＩ Ａｉ－ｇｕｏ１，２，３ 　　（１．Ｍａｒｉｎｅ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｔ Ｗｅｉｈａｉ，Ｗｅｉｈａｉ ２６４０２９，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｊｉｎａｎ ２５００１２，Ｃｈｉｎａ；３．ＳＤＵ－Ｗｅｉｈａｉ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒ＆Ｄ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｗｅｉｈａｉ ２６４０２９，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｒｅｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ fｉｃｉｎ ｆｒｏｍ ｆｉｃｕｓ ｌｅａｖｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ethyl ａｌｃｏｈｏｌ， ｔａｎｎｉｎ ａｎｄ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ fｉｎｃｉｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ａｌｃｏｈｏｌ ｗａｓ ａｓ ｈｉｇｈ ａｓ ４７．９９％； ａｎｄ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｌｄ ｗａｓ ２．０５； ｔｈｕｓ ethyl ａｌｃｏｈｏｌ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｐＨ ｆｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ fｉｎｃｉｎ ｗａｓ ７．０； ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ６５℃． Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｍｏｓｔ ｓｔａｂｌｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ ｐＨ ６．５ ａｎｄ ８．５， ａｎｄ ｉｔｓ Ｋｍ ｖａｌｕｅ ｗａｓ ０．６５６ ０ ｇ／Ｌ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｆｉｃｕｓ ｌｅａｖｅｓ； ficin； ethyl ａｌｃｏｈｏｌ method； tannin method； ｓｕｌｆａｔｅ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ；ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ 　　 　　无花果蛋白酶是有待于开发利用的新的植物蛋白酶［１］，它是一类巯基蛋白酶［２］，主要存在于无花果的乳胶、叶及花托蛋白质中，用途广泛。无花果蛋白酶除参与蛋白质的分解与迁移外，还与细胞信号的传导有关［３］，因其稳定性好、蛋白水解能力强，对多种蛋白质均具有很好的降解作用，因而被广泛应用于食品加工、工业生产和医疗卫生等领域［４，５］。以无花果叶为材料，通过比较乙醇法、单宁法和盐析法3种不同方法，对无花果蛋白酶酶学性质进行研究，为工业化生产及进一步推广应用奠定理论基础。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　１．１．１无花果叶无花果叶，采自山东大学威海分校布兰瑞克品种。 　　１．１．２试剂酪蛋白、半胱氨酸、三氯乙酸、单宁、乙醇、硫酸铵等均为国产分析纯。 　　１．１．３仪器Ａｃｋｍａｎ Ｊ－２０ＸＰ型台式低温离心机，美国；Ａｇｉｌｅｎｔ ８５４３Ｅ型紫外分光光度计，美国；电子分析天平，瑞士梅特勒公司；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｅｌｉｘ ５＋Ｍｉｌｌｉ ＱＳ纯水系统，美国；循环水式多用真空泵，郑州长城升工贸有限公司；ｐＨｓ－２５型酸度计；恒温水浴锅，Ｈｅｉｄｏｌｐｈ ＨＢ ｄｉｇｉｔ。 　　１．２方法 　　１．２．１蛋白质含量测定考马斯亮蓝Ｇ－２５０法［６］。标准曲线的制作参照文献［４］，所得吸光度（ｙ）与蛋白质