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Reg3g在肝纤维化中的表达及初步作用研究.pdf

发布:2025-01-20约9.02万字共66页下载文档
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摘要

肝纤维化是针对肝脏损伤而产生的伤口愈合反应,损伤持续作用肝脏会导致肝纤维

化发展为肝硬化,甚至是肝癌。在肝脏损伤自我修复时,损伤部位被大量的细胞外基质

(extracellularmatrix,ECM)包裹,肝纤维化中被激活的肝星状细胞(HepaticStellateCells,

HSCs)是损伤的肝组织中最主要的胶原生成细胞,是细胞外基质的主要来源。而对HSCs

激活机制的研究有助于干预纤维化的发展以及减少肝癌肝硬化的发生率。胰岛再生源蛋

白(regeneratingislet-derivedprotein,Reg)属于C型凝集素超家族。目前研究显示,在机体

肿瘤、炎症调节、糖尿病等疾病组织和受损组织中均发现有该蛋白家族的表达。本实验

室前期利用RatGenome2302.0芯片检测4种肝病组织中RegII型基因的表达谱,发现

在这4种肝病中Reg3g均明显表达上调,上调程度高于Reg3a和Reg3b,推测Reg3g在

肝病中有着重要作用。

本课题首先通过免疫组化发现人肝癌和肝硬化两种肝病组织中Reg3g的表达显著

上调,随即又构建CCl4诱导和胆总管结扎(BDL)手术诱导两种小鼠肝纤维化模型,

探究Reg3g在肝纤维化中的表达情况,通过Masson染色、免疫组化、免疫荧光、qRT-PCR

和Westernblot等实验方法去检测模型是否建立完成。在此基础上,继续利用免疫组化、

免疫荧光、qRT-PCR和Westernblot等实验方法检测两种纤维化模型中Reg3g的表达情

况,进一步使用免疫共定位和原代肝星状细胞分离培养去探究Reg3g与HSCs活化的联

系。结果发现,Masson染色中两种肝纤维化模型的中央静脉周围有着丰富的蓝色胶原,

且qRT-PCR和Westernblot实验均显示两种纤维化模型中活化型HSCs的标志蛋白

—α-SMA表达显著增加。免疫组化与免疫荧光检测纤维化组织,发现静止型HSCs标志

蛋白—GFAP的表达显著下调,而α-SMA表现为上调。而且Reg3g在qRT-PCR、Western

blot、免疫组化等实验检测中也显示上调表达。免疫共定位实验观察到Reg3g在肝星状

细胞和肝细胞中均有表达,在正常小鼠的原代肝星状细胞分离培养中发现,在HSCs由

静止到活化的1-14d期间,Reg3g的表达与原代肝星状细胞中的α-SMA表达趋势相同,

且在活化状态中表达最高。综上所述,Reg3g在纤维化发展中具有重要调控作用,且可

能参与调控HSCs的活化。

关键词:胰岛再生源蛋白Reg3g,肝纤维化,HSCs,α-SMA,GFAP

ABSTRACT

Hepaticfibrosisisawoundhealingresponsetoliverinjury,andthecontinuedactionoftheinjuryon

thelivercanleadtothedevelopmentofliverfibrosistocirrhosisandevenlivercancer.Duringthe

self-repairofliverinjury,theinjurysiteissurroundedbyalargeamountofextracellularmatrix(ECM).

Hepaticstellatecells(HSCs),whichareactivatedinliverfibrosis,arethemostimportant

collagen-producingcellsintheinjuredlivertissueandarethemainsourceofextracellularmatrix.The

studyoftheac

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