化学合成+microRNA-21+inhibitors+对大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响.pdf

安徽医科大学学报　 Acta Universitatis MedicinalisAnhui　 2015 May;50(5) ·577 · 化学合成microRNA-21 inhibitors对大鼠心肌 成纤维细胞活化增殖的影响 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 张　 猛 ,陶　 辉 ,陈泽文 ,张家贵 ,宣海洋 ,占红英 ,石开虎 摘要　 目的　 探究 microRNA-21 inhibitors对大鼠心肌成纤 21进行了大量研究,但 CFs 中microRNA-21的确切 TM 维细胞活化增殖的影响。 方法　 应用 Lipofectamine 2000 作用机制尚不完全清楚。 该实验以体外培养的CFs Reagent 向大鼠心肌成纤维细胞瞬时转染 microRNA-21 in- 为研究对象,通过观察 microRNA-21 inhibitors转染 hibitors24、48 h后,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR) 后CFs的增殖影响、I 型胶原前胶原 A1(collagen 检测microRNA-21、I型胶原前胶原A1(Col1A1)和α-平滑肌 type I alpha 1,Col1A1)及CFs表型转换为肌成纤维 肌动蛋白(α-SMA)的表达水平;Western blot法检测 Col1A1 细胞的标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth 和α-SMA 的表达水平;MTT 法检测 microRNA-21 inhibitors 对心肌成纤维细胞活化增殖的影响。 结果　 转染 microR- muscle actin,α-SMA)的表达变化,为心肌纤维化、心 NA-21inhibitors的心肌成纤维细胞中,microRNA-21表达下 脏重构提供新的参考依据。 调,Col1A1和α-SMA 的表达下降;转染microRNA-21 inhibi- 1　 材料与方法 tors的心肌成纤维细胞增殖活性明显减弱。 结论　 microR- NA-21inhibitors可明显抑制心肌成纤维细胞增殖活性,提示 1.1　 材料 microRNA-21是心肌成纤维细胞活化增殖的潜在靶向分子, 1.1.1　 实验动物　 雄性 SD 乳鼠30 只,出生 1~3 有利于为干预和预防心肌纤维化的发生发展提供新思路。 d,8 ~9 g,清洁级,购于安徽医科大学实验动物中 关键词　 microRNA-21;心肌成纤维细胞;Col1A1;α-平滑肌 心。 肌动蛋白 1.1.2　 主要试剂　 DMEM培养基、胰蛋白酶、MTT 中图分类号　 R542.23 相关试剂(Sigma 公司,美国);胎牛血清(Gibco 公 文献标志码 A 文章编号 1000-1492(2015)05-0577-05 TM 司,英国);Lipofectamine 2000 Reagent、TRIzol 试 　 　 心肌纤维化是指心肌细胞外基质中胶原纤维过 剂(Invitrogen 公司,美国);microRNA-21 inhibitors、 量积聚、胶原含量显著升高或胶原成分发生改变的 EzOmics miRNA qPCR Detection Primer 试剂盒、 病理过程,是心肌重构的一个重要特