丙氨酸氨基转移酶ALT活性测定.pdf

酶学分析 2013/12/1 Contents 1 酶的分离和纯化 2 酶的活力测定 3 酶促反应动力学 4 酶法分析 5 同工酶 6 酶在医学上的应用 2013/12/1 酶的分离和纯化 2013/12/1 酶的分离纯化技术路线 细胞破碎 动物、植物或微生物细胞 酶提取 发酵液 酶分离纯化 酶浓缩 离心分离，过滤分离，沉淀分 酶贮存 离，层析分离，电泳分离，萃 取分离，结晶分离等。 酶的分离和纯化 1 ．材料的选取与预处理 一般常选择来源丰富、有效成分含量丰 富的脏器组织或细胞为原材料 动物组织常需绞碎、脱脂等预处理以便 于有效成分的提取 2013/12/1 酶的分离和纯化 2 ．细胞的破碎 尽可能采用研磨超声破碎等物理方法； 缓冲液抽提 低温(O～4℃)操作 2013/12/1 酶的纯化 盐析法 聚乙二醇沉淀法 1 ．沉淀法 等电点沉淀法 2 ．层析法 有机溶剂沉淀法 3 ．电泳法 热变性沉淀法 4 ．结晶 2013/12/1 酶的分析 酶的活力测定 酶促反应动力学 2013/12/1 酶的活力测定 1 ．酶活力(Enzyme Activity) 是指酶催化化学反应的能力，也 即酶催化某一化学反应的反应速度。 2 ．酶反应速度 酶活力测定常采用测反应初速度 的方法。底物浓度的变化在起始浓度 的5％以内的速度为初速度。 2013/12/1 测定酶活力 的方法 测定完成一定量 测定在最适宜 反应所需的时间 条件下，单位 ，即在一定条件 时间内底物的 下将全部底物转 化为产物所需的 减少量或产物 时间。 的增加量。 2013/12/1 化学法