GB/T 35332-2017葡萄A病毒检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 OB 中华人民共和国国家标准 GB/T 35332—2017 葡萄A病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Grapevine virus A 2017-12-29 发布 2018-07-01 实施 发布 GB/T 35332—2017 ■1Z■ —1— 刖 百 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口。 本标准起草单位 ：中国检验检疫科学研究院、福建省农业科学院 、中华人民共和国江苏出入境检验 检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:张永江、谢丽雪、李彬、魏梅生、李桂芬、马洁、辛言言、张晓雷、吴兴海、朱水芳。 T GB/T 35332—2017 葡萄A病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了葡萄A病毒（Grapevine virus A）的检疫鉴定方法。 本标准适用于可能携带葡萄A病毒的葡萄苗木、接穗、砧木、插条等繁殖材料的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T 1840植物病毒免疫电镜检测方法 3葡萄A病毒基本信息 学名 ^Grapevine virus A 。 缩写:GVAO 异名：葡萄茎痘相关病毒（Grapevine stem pitting-associated virus） 0 分类地位:卩线形病毒科｛Betaflexiviridae ），葡萄病毒属（ Vitivirus）。 GVA的其他信息参见附录A。 4方法原理 GVA的蛋白和基因组特征是该病毒检疫鉴定的依据 。根据GVA与抗体之间的特异性反应，对植 物样品进行双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA）和免疫电镜检测；依据GVA的基因组特征建 立RT-PCR.实时荧光RT-PCR；通过这些方法的有效组合，判断样品是否带有GVA。 5仪器、用具及试剂 5.1仪器 电子天平（感量0.001 g）、高速冷冻离心机、小型瞬时离心机、普通冰箱、超低温冰箱 （一80 °C ）、制 冰机、旋涡振荡器、磁力搅拌器、高压灭菌锅、pH计、超净工作台、PCR仪、微波炉、电泳仪、电泳槽、凝胶 成像分析仪、酶标仪、透射电子显微镜。 5.2用具 酶联板、可调移液器（2.5 mLJO此、20 fzL.100 ”L 、200 “L 、1 000 卩L）和可调移液器头、离心管、研 钵、微型磨杵等。 5.3试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682中相关规定 。DAS-ELISA试剂