RNAi技术干扰骨肉瘤细胞Dll4表达抑制侵袭转移和血管生成的体内外实验研究的开题报告.docx

RNAi技术干扰骨肉瘤细胞Dll4表达抑制侵袭转移和血管生成的体内外实验研究的开题报告

一、研究背景

骨肉瘤是一种常见的骨骼恶性肿瘤，主要发生在青少年和儿童。其侵袭性强，易转移，并且预后较差。Dll4是一种在血管生成中起关键作用的跨膜蛋白，其高表达与肿瘤的生长、侵袭和转移密切相关。RNA干扰技术可以有效地降低目标基因的表达，进而研究其功能和作用机制。因此，本研究旨在通过RNAi技术干扰骨肉瘤细胞中Dll4的表达，进而研究其对侵袭转移和血管生成的影响。

二、研究目的

1.构建具有高效转染及稳定表达shRNA的骨肉瘤细胞系；

2.通过Westernblot及Real-timePCR等方法检测干扰效果；

3.利用Transwell侵袭实验及Boyden小室实验等方法，探究干扰Dll4表达对骨肉瘤细胞侵袭转移能力的影响；

4.利用Matrigel管状结构实验及Chorioallantoic膜（CAM）实验等方法，研究干扰Dll4表达对骨肉瘤细胞血管生成的影响；

5.探讨干扰Dll4表达在骨肉瘤治疗中的潜在价值。

三、研究方法

1.构建包含针对Dll4的shRNA的慢病毒载体，并将其转染至骨肉瘤细胞中，筛选出稳定表达shRNA的细胞株；

2.通过Westernblot及Real-timePCR等方法检测干扰效果；

3.利用Transwell侵袭实验及Boyden小室实验等方法，探究干扰Dll4表达对骨肉瘤细胞侵袭转移能力的影响；

4.利用Matrigel管状结构实验及Chorioallantoic膜（CAM）实验等方法，研究干扰Dll4表达对骨肉瘤细胞血管生成的影响；

5.对结果进行统计分析，探讨干扰Dll4表达在骨肉瘤治疗中的潜在价值。

四、预期结果

通过RNAi技术干扰骨肉瘤细胞中Dll4的表达，预计可以显著抑制骨肉瘤细胞的侵袭转移及血管生成。同时，本研究将为骨肉瘤治疗提供新思路和新方法。

五、研究意义

骨肉瘤是一种预后较差的骨骼肿瘤，其侵袭性强、易转移。本研究探究了干扰Dll4基因表达对骨肉瘤细胞的影响，可以为骨肉瘤治疗提供新思路和治疗方法。另外，本研究也可以拓展RNA干扰技术在肿瘤治疗中的应用。