微核实验优质课件可编辑.ppt

注意事项：1、剪胸骨时通过剪断两边的肋骨来把整块胸骨取下来，以防不小心把胸骨剪断2、挤出骨髓处的肌肉要剔除干净3、滴到玻片上的小牛血清不要太多，涂时要涂匀，以便推片4、染色前可以先看一下整体涂片情况，细胞分散度是否良好5、关键步骤是制作良好的骨髓涂片以及优良的染色流程图取胸骨，骨髓的制取涂片：先滴一滴小牛血清于载玻片的一端，然后将骨髓液挤入血清里，仔细混匀。固定：将干燥的涂片放入甲醇液中固定5min。染色：将固定过的涂片放入Giemsa应用液中min，然后用磷酸盐缓冲液冲洗透明：用滤纸及时擦干染片背面的水滴，然后放入二甲苯中透明5min。封片：取出滴上适量光学树脂胶，盖上盖玻片，写好标签动物骨髓细胞染色体畸变分析目的和意义:1、学习动物骨髓细胞染色体标本的制作2、了解动物体内染毒及染色体畸变类型染色体畸变分析：染色体结构和数目的异常改变。染色体结构异常通常包括缺失、重复、倒位、易位等；染色体数目变异包括整倍体和非整倍体变化。一般可用光学显微镜检查适当细胞有丝分裂中期的染色体来发现。又称为细胞遗传学实验原理染色体畸变的产生和微核的形成原理相同，观察终点不同，染色体畸变只能在细胞分裂的中期进行观察和分析。为收集足够的中期相细胞，在收获细胞前，用秋水仙碱或乙酰甲基秋水仙碱处理，以阻断微管蛋白的聚合，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，使分裂间期和前期的细胞停在中期相。细胞通过低渗，使染色体均匀散开，然后固定，染色，可在油镜下观察。操作步骤一、收获细胞1秋水仙碱处理实验动物（小鼠4mg/kg处死动物前6h腹腔注射）2取股骨3PBS液5ml冲洗骨髓，1500r/min离心10min，去上清二、低渗1打散沉淀物，加入37℃预温的0.075mol/L的KCl6ml混匀，于37℃低渗15－20min2再加固定液1－2ml混匀，立即于1000r/min离心10min，去上清三、固定1使细胞悬浮，加入固定液4ml混匀，放置室温10－20min，然后1000r/min离心10min，去上清2同样方法再固定一次，去上清，留0.5ml四、制片染色使细胞悬浮，将细胞悬液滴于冰冻的载玻片上，干燥，用10％Giemsa染液染色10－20min，取出清洗自然干五、阅片先在底倍镜下选择分散良好、细胞未破裂的中期分裂相，油镜下观察并记录染色体结构异常和数目异常细胞结果分析与评价结果：以每只动物为观察单位，每只动物观察100个中期分裂相，计算其畸变细胞率分析与评价：1阴性和阳性对照组的畸变率应与所用动物的种属及有关资料相符2试验结果可以用多种统计方法处理，所得结果应该是相同的3各实验组即便细胞率与阴性对照组相比较，应该有显著性差异，还应有剂量反应关系注意事项：低渗是本实验的关键，控制好低渗时间，做出分散良好的染色体标本，关系到实验结果的准确性流程图处死小鼠，取股骨PBS液5ml冲洗骨髓，1500r/min离心10min，去上清打散沉淀物，加入37℃预温的0.075mol/L的KCl6ml混匀，于37℃低渗15－20min加固定液1－2ml混匀，1000r/min离心10min，去上清使细胞悬浮，加入固定液4ml混匀，放置室温10－20min，1000r/min离心10min，去上清同样方法再固定一次，去上清，留0.5ml使细胞悬浮，将细胞悬液滴于冰冻的载玻片上，干燥用10％Giemsa染液染色10－20min，取出清洗自然干，阅片唐氏的临床特征为：严重智力低下，独特的面部和身体畸形(如宽眼距，低鼻梁，肌无力，肢体短小，及贯通手等)，先天性心脏病，消化道畸形等，白血病的发病率比一般人要高得多。患者的平均寿命在30岁左右。唐氏这类染色体病与单基因遗传病的一个重要区别就是它是偶发的，每个孕妇都有生患儿的可能，发病无明显的种族差异和家族积聚现象。世界各地大量群体调查的结果表明种族之间发病率几乎相同，对海外华人的群体调查也显示中国人的发生率与其它民族无差异（Hook，1994）。国内有关唐氏