高效液相色谱柱前衍生技术在低浓度药物分析中的应用.pdf

医药导报2008年1月第27卷第1期 ·93· 高效液相色谱柱前衍生技术在低浓度药物分析中的应用 张相年，李超，孙智平 (广州军区广州总医院药学部，5100lO) [摘要]围绕衍生化试剂2，4·二硝基氟苯、酰氯、醛类、异硫氰酸苯酯和对溴苯甲酰甲基溴等，总结柱前衍生处 理方法、高效液相色谱(HPLc)的分析和方法的检测限，阐明柱前衍生法在低浓度药物分析中的应用及其意义。 [关键词]柱前衍生；色谱法，高效液相；药物分析 [中图分类号]R927．1 [文献标识码]A [文章编号] 1004_078l(2008)0l旬093-03 低浓度的药物分析是药学研究的一个重要分支，尤其是血 限量的物质，经衍生化处理后在350nm下检测，其定量限 药浓度分析，是药物研发中必定会遇到的问题，也是临床药学 (s／，v=10)达2斗g·mL_J。 中常遇到的问题。药物在体内的有效浓度较低，常常每毫升在 2用酰氯作为衍生化试剂 皮克至微克水平，对于那些没有强紫外吸收或能激发荧光的药 用于衍生化的酰氯试剂常常是芳基甲酰氯类的化合物。 物分子用常规的检测方法难于达到此检测限。目前常用免疫 如对一甲氧基苯甲酰氯、丹磺酰氯、氯甲酸芴甲酯、2，4一二硝基苯 检测法来检测。但免疫分析需要昂贵的分析仪器和成本较高 的试剂盒。高效液相色谱(HPLc)仪在我国已很普及，常配置果被测的物质分子中含有多个氨基或还有羟基，可以结合多分 紫外检测器，但无法分析没有紫外吸收或激发荧光的样品。为 子的衍生化试剂。酰氯往往在水中的溶解度较小，常常需要溶 了克服此不足，可采用化学衍生技术接入强紫外吸收基团或能 解在与水互溶的溶剂中，如丙酮、乙腈或四氢呋喃。为了使衍 激发产生荧光的基团，转化成强紫外吸收或激发荧光衍生物， 生化反应彻底，常需加热。 这样就能够大大提高检测器的灵敏度。 用这种方法可以测定核糖霉素，经2，4一二硝基苯甲酰氯的 衍生化技术属于有机化学领域，要想将一个没有紫外吸收 乙腈溶液衍生化，在355nm下检测限达到1．5ng，而2，4一二硝 或激发荧光的分子成功转变为紫外可测或荧光可测的产物，必 o。头孢拉定中 基氟苯进行衍生，其检测限可达到0．5ng水平‘7 须借助化学反应键合有紫外吸收或激发荧光的功能基团。适 精氨酸和头孢氨苄是限量物质，这3种物质分子中的胺基可用 合HPLc分析的衍生化反应有特殊要求：①能迅速、定量地进9一芴甲基氯甲酸酯的丙酮作为衍生化试剂，衍生化产物在荧光 nH∥340 行，且反应条件温和；②选择性高，最好只与待测成分反应；③ 检测波长254 nm(入。。／入。。)可同时测定这3种物质¨。。 衍生化试剂和副产物不能影响测定。要满足这些条件，适合用 芴甲基氯甲酸酯也可用作紫外衍生化试剂测定硫酸庆大霉素 于衍生分析用的试剂不多。笔者对近年来HPLc用衍生试剂分和硫酸新霉素的量，检测波长265nm，硫酸庆大霉素、硫酸新霉 析药物进行综合总结。 素的分别为1．0和0．5mg·L。1一。 1 2。4一二硝基氟苯作为衍生化试剂 对硝基苯甲酰氯是一种荧光衍生化试剂，其乙腈溶液对醇 药物分子如包含有胺基(包括氨基酸…、各种抗生素等)能 或酚羟基可衍生化。如测定环境中的雌激素类物质，雌二醇和 与2，4．二硝基氟苯中的氟亲核取代，用此方法进行衍生化。pH nH∥316 雌三醇经衍生化处理后，荧光检测波长228