实验4特殊染色法.ppt

实验四 特殊染色法 实验目的要求 了解抗酸染色法、芽胞染色法、荚膜染色法、鞭毛染色法的原理 熟悉抗酸染色法、芽胞染色法、荚膜染色法、鞭毛染色法的方法以及意义 实验材料与方法 材料: 菌种：卡介苗、枯草杆菌培养物 染液：抗酸染色液、芽胞染色液 其他：玻片、接种环、酒精灯 无菌生理盐水、显微镜等 方法： 细菌涂片的制作：涂片、干燥、固定 　　染色：抗酸染色法、芽胞染色法 油镜使用：观察染色结果并记录 （一）抗酸染色法 ★抗酸性细菌如结核杆菌等分枝杆菌属细菌，细菌细胞壁有很多脂类物质，石碳酸复红加温染色后，其中的分枝菌酸与石碳酸复红结合成牢固的复合物，能够抵抗盐酸酒精的脱色，使菌体保留红色，故称抗酸染色法。 ★其他非抗酸菌和组织细胞因不能抵抗盐酸酒精的脱色，被脱成无色，后经碱性美兰染色后染成兰。 2、抗酸染色方法 染液组成： 石碳酸复红、3％盐酸酒精、碱性美兰 染色方法： 3、抗酸染色结果及意义 结果： 　　红色－－抗酸染色阳性菌 　　 兰色－－抗酸染色阴性菌 意义： 　　用于鉴定分枝杆菌属细菌以及某些放线菌 结核分枝杆菌（抗酸染色） 结核分枝杆菌（抗酸染色） （二）芽胞染色法 ★芽胞是细菌在不良的环境条件下形成的休眠体。细菌能否形成芽胞以及芽胞的形状、芽胞的位置、是否膨大等特征是鉴定细菌的重要依据之一。 由于芽胞壁厚，通透性差，不易着色。为了能使芽胞着色便于观察，特用芽胞染色法。 其基本原理是：用着色性强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅可以进入菌体也可进入芽胞内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽胞一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽胞仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽胞囊被染成复染剂的颜色，使芽胞和菌体更易区别。 2、芽胞染色方法 染液组成： 5％孔雀绿水溶液、 0.5％番红水溶液 染色方法： 3、芽胞染色结果及意义 结果： 　 芽胞－－绿色 　　菌体及芽胞囊－－红色 意义： 　　用于观察芽胞的形态特征以及鉴定细菌。 破伤风芽胞梭菌 （三）鞭毛染色法 ★鞭毛是细菌的运动器官，细菌是否具有鞭毛以及鞭毛着生的位置和数量是细菌的一项重要形态特征。由于细菌鞭毛很纤细，一般不能用光镜直接观察，须用电镜。要用普通光学显微镜观察鞭毛，必须用鞭毛染色法。 鞭毛染色的原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后进行染色。 2、鞭毛染色方法 染色方法： Leifsion氏染色法 染色液： Leifsion氏染色液 制片：用记号笔在载玻片的反面将玻片分成3~4个等分区，在每个小区的一端滴一小滴菌液，将玻片倾斜，让菌液流到另一端，用滤纸吸去多余的菌液。室温或37℃温室自然干燥。 鞭毛染色过程 3、鞭毛染色结果及意义 结果： 　　菌体－－红色 　　 鞭毛－－红色 意义： 　观察鞭毛的形态特征以及可鉴定细菌。 * * * * 1、原理 石碳酸复 红 初染 3％盐酸酒精 脱 色 碱性美兰 复 染 加温染5分钟 0.5-1min 影响抗酸染色的关键步骤是脱色 冷却后水洗 水洗 水洗 干燥 1~3min 1、原理 加数滴孔雀绿染液于涂片上 待玻片冷却后 水 洗 番红染液复染 微火加热至染料冒蒸汽 用缓流自流水冲洗 维持5分钟 至流出水无色 水洗 干燥 2min 1、原理 加Leifsion氏染色液于第一区 染数分钟 干燥镜检 加Leifsion氏染色液于第二区 加Leifsion氏染色液于第三、四区 染数分钟 整个玻片表面都出现铁诱色沉淀、染料表面现出金色膜 直接用水轻轻冲洗（不要先倾去染液再冲洗） 10分钟