【2017年整理】八角茴香油的抗菌作用.doc

八角茴香油的抗菌作用 [关键词] 八角茴香油；提取；抗菌；抗氧化 [key words] star anise oil; extraction; antibacterial; antioxidative 八角茴香（《本草纲目》）、大茴香等，主产于我国；干燥的成熟果实入药，为常用中药，有祛风理气、和胃调中、温阳散寒、理气止痛等功效。而且其味之浓郁，常用于食品和药物制剂的矫味和防腐。八角果实含挥发油、有机酸类、黄酮类、茴香醚、茴香醛等有效成分，具有抑菌作用。近年来，科学家对天然植物的抗菌防腐作用进行了深入研究并发现了不少新颖“植物抗菌素”，并从植物体内的次生物质中寻找能抑制有害生物的有效成分，用人工直接提取应用或明确有效成分结构后，人工合成制作新型抗生素成为新药开发热点之一。同时开发高效、无毒、安全的天然抗氧化剂，具有广阔的前景。笔者对八角的有效成分——八角茴香油的提取、抗菌及抗氧化性方面进行了初步的研究，结果如下： 1 仪器与试药 1.1 仪器 分析天平（上海tg328a，上海精密科学仪器）；753型紫外可见分光光度计（上海第三仪器厂）；岛津uv-240z紫外分析仪；sxt-2索氏提取器（上海洪纪仪器设备有限公司）；微量移液器（thermofish，芬兰雷勃）；八角（广州市药材公司）；95%乙醇（药用）；dpph自由基（sigma，批号：s90790-379）。 1.2 供试菌种 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、黑曲霉菌、酵母菌均由广州工业微生物检测中心提供。 2 方法与结果 2.1 正交试验优选提取工艺 2.1.1 供试验用八角原料的制备 将八角置于60℃烘箱中烘干，粉碎，过60目筛得，备用。 2.1.2 乙醇回流提取试验条件的筛选 采用正交试验设计，将影响提取效率的主要因素：八角与95%乙醇的用量比例、索氏提取的虹吸次数、室温下八角在95%乙醇中浸泡时间作为试验因子，进行3因素3水平的正交试验设计，每个试验方案重复3次，每次投放供试用八角原料20 g，收集所得八角茴香油，计算八角茴香油的提取率，取3次试验值的平均值作为各试验方案的评价指标。因素水平见表1。 2.1.3 八角茴香油提取 称取置于60℃烘箱中烘干，粉碎，过60目筛的八角原料20 g放入烧瓶，加入适量95%乙醇分别浸泡1.2、1.8、2.4 h，过滤，直接用过滤滤纸将过滤后的八角粉包成圆柱形，放入索氏提取器内，用少量95%乙醇洗涤烧瓶2~3次，洗涤液和滤液一起全部集合在烧瓶，加入95%乙醇至预定量，加热回流提取，回流至预定条件，停止加热，自然冷却，用倾泻法将烧瓶中的提取液转移到烧杯中，用少量乙醇洗涤烧瓶2~3次，合并提取液回收乙醇并浓缩。 2.1.4 鉴别 取“2.1.3项”下提取的八角茴香油1 ml，加无水乙醇2 ml ，溶解得供试品溶液。①精密吸取该供试溶液2 μl点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶ｇ薄层板上，挥干，再点加间苯三酚盐酸试液约2 μl，即显粉红色至紫红色的圆环。②另精密吸取该供试溶液10 μl置10 ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，照分光光度法（《中国药典》2010年版附录ⅴa）测定，在259 nm 波长处有最大吸收。 2.1.5 八角茴香油提取率 八角茴香油提取率（%）＝八角茴香油重量/八角粉重量×100％。 2.1.6 试验与结果 根据表1 选用l9（34）正交试验表研究提取工艺参数，试验设计与结果见表2，方差分析见表3。 2.2 抑菌实验 2.2.1 抑菌试液的制备 以95%乙醇倍比稀释，取“2.1.3项”下提取的八角茴香油配制成含生药100%（即1 ml含1 g）的抑菌试液50 ml；另取倍比稀释用的95%乙醇50 ml作抑菌对照试剂，备用。 2.2.2 菌悬液的制 配制牛肉膏蛋白胨培养基，转接金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、黑曲霉菌和酵母菌至试管斜面，25℃培养24 h活化，用灭菌注射用水洗下菌苔制成菌苔菌悬液，制成菌悬液，细菌使用平板计数法，霉菌、酵母菌使用显微镜直接记数法测菌体个数， 调至浓度为含菌体为1.5×108 cfu/l的菌悬液，备用。 2.2.3 抑菌滤纸片的制备 选择吸水性强的滤纸，烘干，用打孔器制成若干直径为6 mm的圆形纸片，高压灭菌。在经高压灭菌干燥后的培养皿中倒入抑菌试液30 ml，用镊子将滤纸片夹入浸泡12 h后后置于经干燥灭菌的培养皿中，备用。 2.2.4 抑菌圈的测定[5] 取制备好的抑菌滤纸片贴在含菌平板上， 每皿贴3片。细菌置培养箱37℃培养24 h， 酵母菌置培养箱28℃培养48 h， 霉菌置培养箱28℃培养1周。选取抑菌圈比较明显的平板测定抑菌圈直径，取3贴测定的抑菌圈直径的平均值。95%乙醇作抑菌对照，同时设立灭菌注射用水阴性对照。结果：大肠埃希菌的抑菌圈直径是14.21