E2-gAD融合DNA疫苗的构建与免疫原性研究的开题报告.docx

HCVE1/E2-gAD融合DNA疫苗的构建与免疫原性研究的开题报告

1.研究背景

世界卫生组织估计全球约有7000万人感染丙型肝炎病毒（HCV），其中大多数都没有明显症状，但可能在多年时间内导致肝细胞损伤，最终演变成肝硬化和肝癌。目前，虽然有多种药物和疫苗正在开发中，但仍然没有有效的治疗和预防手段。

HCV的E1和E2蛋白是其外膜糖蛋白，是病毒进入宿主细胞的关键分子。已有研究表明，HCVE1/E2融合蛋白可以诱导机体产生广泛的抗体反应，对预防HCV感染具有潜在的价值。

2.研究目的

本研究旨在构建HCVE1/E2-gAD（gallineanemiavirusderivedpeptides）融合DNA疫苗，并探究其在小鼠体内的免疫原性和对HCV感染的保护作用，为HCV疫苗的研发提供理论和实验基础。

3.研究内容和方法

（1）构建HCVE1/E2-gAD融合DNA质粒：利用PCBAS（ProteinComposition-BasedAssemblySystem）技术，在适当的启动子和终止子的控制下，将HCVE1/E2和gAD基因序列组装成完整的融合DNA序列，插入到质粒中，并通过双酶切、测序等方法对融合构建进行验证。

（2）体外表达和纯化HCVE1/E2-gAD融合蛋白：利用CHO细胞表达系统等方法，将构建好的HCVE1/E2-gAD融合DNA质粒转染到细胞中进行表达，提取纯化后的融合蛋白。

（3）小鼠免疫试验：将纯化后的HCVE1/E2-gAD融合蛋白作为抗原，分别以ELISA和Westernblot等方法检测小鼠产生的抗体水平和特异性。同时，通过病毒负荷、肝功能指标等实验指标评价其对HCV感染可能产生的保护作用。

4.预期结果

本研究预计可以成功构建HCVE1/E2-gAD融合DNA质粒，并在CHO细胞中表达出融合蛋白，得到纯化后的蛋白样品。在小鼠免疫试验中，预计可以检测到明显的抗体水平和特异性。同时，预计HCVE1/E2-gAD融合DNA疫苗能够对HCV感染具有一定的保护作用，为HCV疫苗的研发提供理论和实验基础。