大蒜素协同草酸铂对直肠癌细胞凋亡作用的影响（论文资料）.doc

大蒜素协同草酸铂对直肠癌细胞凋亡作用的影响（论文资料） 文档信息 ： 文档作为关于“医学心理学”中“肿瘤学”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文7777字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：大蒜素协同草酸铂对直肠癌细胞凋亡作用的影响 2 1 材料与方法 2 1．5 细胞凋亡检测 3 1．6 两药联合应用72 h时草酸铂IC50值的变化 3 1．7 统计学处理 4 2 结果 4 3 讨论 5 文2：大蒜素协同紫杉醇对肺癌细胞杀伤作用的实验研究 6 1 材料与方法 6 2 结 果 9 3 讨 论 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 大蒜素协同草酸铂对直肠癌细胞凋亡作用的影响（论文资料） 文1：大蒜素协同草酸铂对直肠癌细胞凋亡作用的影响 1 材料与方法 1．1 材料 直肠癌细胞系SW480细胞、Annexin V 细胞凋亡试剂盒由上海莱鑫仪器有限公司提供。 RPMI1640培养基和胰酶购自Gibco公司，小牛血清购自杭州四季青公司，噻唑蓝(MTT)、DMSO购自Amresco公司，96孔板购自Costar公司，碘化丙啶(PI)、RNase为Fluka公司产品。 FACScan()流式细胞仪;Bio-RAD Mod-el550()酶标仪。 1．2 细胞培养 将SW480细胞接种在100 ml培养瓶中，用含15%小牛血清的RPMI1640培养液， 于37℃、5%CO2的培养箱中培养，细胞贴壁80%时传代，1周传2~3次。实验用细胞为接种24 h后的对数生长期细胞。 1．3 MTT法检测大蒜素和草酸铂对直肠癌细胞SW480的抑制作用 消化收集对数生长期细胞并调整成浓度为5×104 ml的单细胞悬液，接种于96孔培养板中，24 h后加入以RPMI1640培养液配制的大蒜素，终浓度分别为80、40、20、10和5 μg/ml，同时设立含RPMI1640全培养基的空白对照组。同法配制草酸铂，终浓度分别为40、20、10、5和2．5 μg/ml。每一浓度设5个复孔，分别继续培养24、48和72 h；弃上清液后每孔加MTT 50 μl，浓度为1 mg/ml，混匀，于37℃、5%CO2 的培养箱中孵育4 h；弃上清液后每孔加150 μl的DM-SO溶解蓝紫色颗粒，以酶标仪检测波长490 nm的每孔吸光度值(A值)。实验重复2次，计算细胞抑制率。 细胞增殖抑制率=(1-实验组光密度值/对照组光密度值)×100%。采用LOGIT药物浓度抑制统计分析软件计算IC50值。 1．4 细胞周期分析 用流式细胞仪检测，取生长状态良好的细胞接种在大方瓶中，培养至密度达60%~70%时分别加入不同浓度大蒜素，设立正常对照组，培养72 h收集细胞。收集的细胞以PBS洗3次，以4℃70%乙醇固定液，1 000 min离心5 min，弃去乙醇，PBS洗3次后，加入10 μg/ml的RNase于37℃消化0．5 h，加入50 μg/ml的PI于4℃染色0．5 h，流式细胞仪进行DNA含量和细胞周期分析，所用软件为Cellqest。 1．5 细胞凋亡检测 以Annexin V-FITC标记法定量检测草酸铂和大蒜素联合应用时细胞凋亡的变化。将终浓度为IC50值的大蒜素和草酸铂分别加入直肠癌细胞SW480，培养72 h；另一组细胞先经浓度为1/2IC50 值的大蒜素诱导24 h后再加浓度为IC50值的草酸铂作用72 h，并设立正常对照组。细胞用0．25%胰蛋白酶消化收集，PBS清洗2次，于4℃ 2 000 min离心5 min，收集(1~5)×105细胞，吸取250 μl的Binding Buffer和250 μl的灭菌去离子水，混匀；用上述500 μl的Binding Buffer悬浮细胞，加1 μl Annexin V-FITC，室温下混合，加入5 μl浓度为20 mg/L的PI，避光室温反应5 min，用流式细胞仪分析(绿色荧光用FL2来检测，红色荧光用FL1来检测) 1．6 两药联合应用72 h时草酸铂IC50值的变化 依据1．3所测的大蒜素和草酸铂抑制直肠癌SW480细胞72 h的IC50 值，一组应用终浓度为IC50值大蒜素诱导培养细胞24 h后，草酸铂再作用于SW480细胞72 h检测草酸铂IC50值的变化；另一组将IC50浓度大蒜素与草酸铂同时作用于SW480细胞检测草酸铂72 hIC50值的变化。 1．7 统计学处理 数据采用（x±s）表示，两组间均数比较采用t检验，多组均数比较采用方差分析