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液相色谱—质谱联用的原理和应用.ppt

发布:2019-05-15约1.54万字共123页下载文档
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下面讲解应用示例 高效液相色谱――电喷雾串联质谱法测定清开灵复方中胆酸 采用HPLC/MS/MS技术,从清开灵注射液中,通过分子量、二级质谱碎片信息定性测定了清开灵复方中的胆酸。 直接进样实验。清开灵注射液经过初步化学处理后采用电喷雾(ESI)离子源,在负离子扫描方式下,得到一极质谱图、即分子离子峰[M-H]-,再用二级质谱(MS/MS)扫描目标分子离子的碎片峰。再以相同的实验条件对标准品进行测定,做出其一级、二级质谱图。 通过对样品进行分子离子峰的扫描发现[M-H]-的峰中有一个很强的407,根据样品处理过程以及对复方各单味药材的研究,其应该为一有机酸的负离子峰,并初步推断其为胆酸。(胆酸的分子量为408)。如图所示:通过对照样品(右)和标准品(左)的二级质谱图,发现其主要碎片峰均吻合较好。 如何用API LC-MS/MS 检测硝基呋喃类代谢物 第一步:配制衍生化后的硝基呋喃代谢物标准溶液,乙腈/水体系,浓度10PPM 确认仪器已经校准,气体、电压工作正常。 测试条件: 离子化方式: ESI+ 进样5ul/min, Q1 SCAN 观察M/Z 335,236,249,209及同位素内标峰,通过调节DP,使这几个峰最强。 注意:1如买来的是已经衍生化的标准品,则可四种混配。 2如是用户由硝基呋喃代谢物衍生化的,最好四种分别配制,要求Q1 SCAN能明显观察到上述 离子。下图是一个用户的混标,只看到335和209。 第二步:以第一步测得值为母离子,做PRODUCT ION SCAN(MS2),调节CE等参数,使母,子离子都具有一定强度,平滑后得到MS2谱,从各母离子中各选择2个最高的子离子,分别为 呋喃它酮AMOZ: M/Z 291,262; 呋喃唑酮AOZ: M/Z 134,104; 呋喃妥因AHD: M/Z 134,104或178; 呋喃西林SEM: M/Z 192,166,准确到0.1。 注意:母离子要采用Q1SCAN测得值,子离子采用PRODUCT ION SCAN测得值。典型MS2谱图如下 AMOZ AMOZ-D5 AOZ AHD AHD内标(选252/134 ) SEM内标(选212/195) 第三步:以第二步选定的离子对,例如335.1/262.2 等,做MRM SCAN 。 第四步:通过软件操作优化各种参数,如温度、气流等。 第五步:接好色谱柱,编辑LC梯度洗脱,进样,观察色谱峰形及保留时间是否合适,否则调节流动相,优化色谱条件。 第六步:用空白提取液配制同样浓度标样,按上一步方法进样,观察色谱峰形及保留时间是否合适,峰高有无变化,有无离子抑制现象,否则调节流动相,优化色谱条件。 第七步:用空白提取液配制一系列不同浓度硝基呋喃代谢物标样,按上一步方法进样,例如,分别稀释为浓度0.25ug/kg, 0.5ug/kg, 1.0ug/kg, 2.0ug/kg, 4.0ug/kg, 8.0ug/kg, 等等。 第九步:按上述方法采集数据,做标准曲线,并进行硝基呋喃代谢物样品的测定。如果4种同位素内标齐全,则定量时一一对应计算,如只有AOZ-D4和AMOZ-D5,则1种内标可对应2种硝基呋喃代谢物。 SEM结果1 SEM线性 谢谢! 联系方式: 洪爱华 生命科学技术学院二楼实验技术中心分析测试室217 谢 谢! 放映结束 感谢各位观看! 让我们共同进步 LC-MS中常见的本底离子 m/z 50-150, 溶剂离子,[(H2O)nH+ ,n= 3-112] m/z 102, H+乙腈 +乙酸, C4H7NO2H+,102.0549 m/z149, 管路中邻苯二甲酸酯的酸酐, C8H4O3H+,149.0233 m/z 288, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 279, 管路中邻苯二甲酸二丁酯 C16H22O4H+, 279.1591 m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子 m/z391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+, 391.2843 m/z413, 邻苯二甲酸二辛酯+钠, C24H38O4Na+, 413.2668 m/z 538, 乙酸+氧 +铁(喷雾管), Fe3O(O2CCH3)6, 537.8793 分子量测定失败的原因 a)流动相不合适 b)不挥发性盐的影响 c)成分复杂,杂质太多 d) 样品浓度不够 e)pH值不合适 f)样品在源内分解或碎裂 目标化合物分析 (1)选择离子监测(SIM) SIM用于检测已知或目标化合物,比全扫描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的方式一般用在定量目标化合物之前,而且往往需要已知化合物的性质。
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