液相色谱—质谱联用的原理和应用.ppt

下面讲解应用示例 高效液相色谱――电喷雾串联质谱法测定清开灵复方中胆酸 采用HPLC/MS/MS技术，从清开灵注射液中，通过分子量、二级质谱碎片信息定性测定了清开灵复方中的胆酸。 直接进样实验。清开灵注射液经过初步化学处理后采用电喷雾（ESI）离子源，在负离子扫描方式下，得到一极质谱图、即分子离子峰[M-H]-，再用二级质谱（MS/MS）扫描目标分子离子的碎片峰。再以相同的实验条件对标准品进行测定，做出其一级、二级质谱图。 通过对样品进行分子离子峰的扫描发现[M-H]-的峰中有一个很强的407，根据样品处理过程以及对复方各单味药材的研究，其应该为一有机酸的负离子峰，并初步推断其为胆酸。（胆酸的分子量为408）。如图所示：通过对照样品(右)和标准品（左）的二级质谱图，发现其主要碎片峰均吻合较好。 如何用API LC-MS/MS检测硝基呋喃类代谢物 第一步：配制衍生化后的硝基呋喃代谢物标准溶液，乙腈/水体系，浓度10PPM 确认仪器已经校准，气体、电压工作正常。 测试条件： 离子化方式: ESI+ 进样5ul/min， Q1 SCAN 观察M/Z 335，236，249，209及同位素内标峰，通过调节DP，使这几个峰最强。 注意：1如买来的是已经衍生化的标准品，则可四种混配。 2如是用户由硝基呋喃代谢物衍生化的，最好四种分别配制，要求Q1 SCAN能明显观察到上述 离子。下图是一个用户的混标，只看到335和209。 第二步：以第一步测得值为母离子，做PRODUCT ION SCAN（MS2），调节CE等参数，使母，子离子都具有一定强度，平滑后得到MS2谱，从各母离子中各选择2个最高的子离子，分别为呋喃它酮AMOZ： M/Z 291，262；呋喃唑酮AOZ： M/Z 134，104；呋喃妥因AHD： M/Z 134，104或178；呋喃西林SEM： M/Z 192，166，准确到0.1。注意：母离子要采用Q1SCAN测得值，子离子采用PRODUCT ION SCAN测得值。典型MS2谱图如下 AMOZ AMOZ-D5 AOZ AHD AHD内标（选252/134 ） SEM内标（选212/195） 第三步：以第二步选定的离子对，例如335.1/262.2 等，做MRM SCAN 。 第四步：通过软件操作优化各种参数，如温度、气流等。 第五步：接好色谱柱，编辑LC梯度洗脱，进样，观察色谱峰形及保留时间是否合适，否则调节流动相，优化色谱条件。 第六步：用空白提取液配制同样浓度标样，按上一步方法进样，观察色谱峰形及保留时间是否合适，峰高有无变化，有无离子抑制现象，否则调节流动相，优化色谱条件。 第七步：用空白提取液配制一系列不同浓度硝基呋喃代谢物标样，按上一步方法进样，例如，分别稀释为浓度0.25ug/kg, 0.5ug/kg, 1.0ug/kg, 2.0ug/kg, 4.0ug/kg, 8.0ug/kg, 等等。  第九步：按上述方法采集数据，做标准曲线,并进行硝基呋喃代谢物样品的测定。如果4种同位素内标齐全，则定量时一一对应计算，如只有AOZ-D4和AMOZ-D5，则1种内标可对应2种硝基呋喃代谢物。 SEM结果1 SEM线性 谢谢! 联系方式: 洪爱华 生命科学技术学院二楼实验技术中心分析测试室217 谢 谢！ 放映结束 感谢各位观看！ 让我们共同进步 LC-MS中常见的本底离子 m/z 50-150, 溶剂离子，[(H2O)nH+ ，n= 3-112] m/z 102, H+乙腈 +乙酸, C4H7NO2H+,102.0549 m/z149, 管路中邻苯二甲酸酯的酸酐, C8H4O3H+,149.0233 m/z 288, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 279, 管路中邻苯二甲酸二丁酯 C16H22O4H+, 279.1591 m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子 m/z391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+, 391.2843 m/z413, 邻苯二甲酸二辛酯+钠, C24H38O4Na+, 413.2668 m/z 538, 乙酸+氧 +铁（喷雾管）, Fe3O(O2CCH3)6, 537.8793 分子量测定失败的原因 a）流动相不合适 b）不挥发性盐的影响 c）成分复杂，杂质太多 d) 样品浓度不够 e）pH值不合适 f）样品在源内分解或碎裂 目标化合物分析 （1）选择离子监测（SIM） SIM用于检测已知或目标化合物，比全扫描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的方式一般用在定量目标化合物之前，而且往往需要已知化合物的性质。