绵羊胚胎移植技术规程.docx
DB××/T××××—××××
2
绵羊胚胎移植技术规程
1范围
本标准规定了供体羊的选择、超数排卵及人工授精、手术冲胚技术及胚胎质量鉴定、受体羊的选择及饲养管理、胚胎内窥镜移植。
本标准适用于京、津、冀地区绵羊的胚胎生产和鲜胚移植。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
NY/T816－2004肉羊饲养标准
NY5030无公害食品畜禽饲养兽药使用准则
DB12/T137—2012肉用绵羊饲养管理技术规范
3术语和定义
下列术语与定义适用于本标准。
3.1胚胎移植（EmbryoTransfer）将良种母羊的早期胚胎从母羊的子宫或输卵管取出，移植到另一只生理状态相同的母羊的子宫或输卵管内，使之发育成个体。
3.2供体羊（DonorSheep）指提供或生产胚胎的母羊。
3.3受体羊（ReceptorSheep）接受胚胎的母羊。
3.4捡胚（Embryocollection）通过实体显微镜，将胚胎从收集到的子宫回收液中捡出。
3.5腹腔内窥镜输精（Laparoscopicinsemination）借助腹腔内窥镜将精液输入发情母羊的子宫内。
4技术要素
DB××/T××××—××××
3
4.1药物、器械和实验室要求
4.1.1试剂与药瓶
所用的试剂、药品见附录A4.1.2设备、器械和环境所需的设备与耗材见附录B。
胚胎实验室：为胚胎在体外操作专用实验室，应保持室内无菌、无尘，室内温度保持在20-25℃,避免阳光直射。
手术室：主要进行胚胎收集，地面要防滑，清洁、消毒，在与胚胎实验室隔墙上安装传递窗，手术室室内温度在15℃以上。
4.2同期发情和超数排卵
4.2.1供体羊选择
4.2.1.1供体羊品种优良、生产性能好；
4.2.1.2遗传稳定、谱系清楚；
4.2.1.3体质健壮。繁殖机能正常，无遗传和传染性疾病。年龄在1岁至4岁为宜；
4.2.1.4具有畜牧部门颁发的种畜禽鉴定合格证书。
4.2.2超数排卵
4.2.2.1同期发情和超数排卵激素的选择CIDR（硅胶孕酮栓）
FSH（促卵泡素），LH（促黄体素），
PMSG（孕马血清促性腺激素），
4.2.2.2同期发情和超数排卵的方法
供体羊超数排卵及受体羊胚胎移植方案见附录C。
在母羊发情周期的任何一天给受体放置孕酮栓(CIDR)，记为第一天，在第10天开始超排，以肌肉注射FSH，一天两次，连续四天，递减注射，在注射的第七次撤掉CIDR，第八次肌注PMSG，开始观察发情并配种，确定供体羊发情，并在撤栓后38小时注射LH，供体羊注射FSH总剂量计算（按体重）：6mg/kg。见表1。
DB××/T××××—××××
4
4.2.3供体羊发情鉴定及人工输精
4.2.3.1供体羊发情鉴定
在第7次注射FSH后20小时开始对超排供体羊观察发情。每隔8小时观察发情一次。观察方法：试情公羊扎好试情布，放入母羊群中试情，以母羊站立接受试情公羊爬跨作为母羊的发情标准。
4.2.3.2供体羊人工输精
供体羊的输精采用定时内窥镜人工输精的方法。
（1）种公羊的选择标准
品种优良，谱系清楚，遗传性稳定、生产性能良好，健康无病。
（2）人工授精操作要求
（3）采精前对种公羊外生殖器清洗消毒。采精、精液稀释、输精用的器械严格灭菌、消毒。
（4）稀释后的精液温度于25℃-30℃保存。
（5）鲜精活力在0.7以上，每次输精有效精子数不少于30×106。
（6）人工授精的最适合时间
供体母羊在撤栓后试情，了解发情情况，在48小时1次腹腔内窥镜输精，输精量：供体羊每侧子宫角输精0.5ml。
（7）腹腔内窥镜输精方法
①发情的供体母羊在输精前12小时空腹，将供体母羊保定在手术床上，手术部位备皮、术部消毒。输精时将发情羊采用仰卧头低尾高斜倒立方式保定，角度为45℃。
②在输精时打孔器的刺入位置，用腹腔镜的打孔器分别在输精母羊腹部乳房下2-3cm处，腹中线两侧刺入2孔。通过观察镜，将精液输入羊的两侧子宫角，每只羊输精0.5-1ml。
③手术部位消毒，注射抗炎药物，解除供体羊保定。
4.3供体羊胚胎手术法收集
4.3.1供体羊收集胚胎所需器械
手术床、体视显微镜、剃须刀、创布、止血纱布、剪毛剪、手术刀柄、手术剪、止
DB××/T××××—××××
5
血钳、巾帕钳、持针器、手术刀片、缝合线、缝合针、镊子、5ml注射器、20ml注射器，50ml注射器