MMPs介导的肿瘤靶向性rhTNF-α融合蛋白表达纯化及其生物学活性研究的开题报告.docx

MMPs介导的肿瘤靶向性rhTNF-α融合蛋白表达纯化及其生物学活性研究的开题报告

一、研究背景

实验室之前的研究发现，肿瘤组织中的MMPs（matrixmetalloproteinases，基质金属蛋白酶）水平明显升高，并引起了肿瘤的侵袭和转移，因此MMPs已成为肿瘤治疗研究的新领域。而人类肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种重要的免疫调节分子，能够参与多种生物学过程，如细胞凋亡、炎症、病毒清除和肿瘤抗体依赖性细胞介导细胞毒性等。但是，TNF-α单独应用时可能会引起副作用，如高热、低血压、皮肤炎、休克等。因此，在将TNF-α用于临床治疗中，需要同时考虑降低其副作用和提高其肿瘤靶向性。

近年来，研究人员利用MMPs依赖性基质降解过程构建了一种新型的TNF-α靶向融合蛋白。此蛋白在正常组织中无法释放，只有在MMPs水平升高的肿瘤组织中才能够被MMPs切割释放出来，从而发挥抗肿瘤作用。然而，对于这种融合蛋白的生物学活性和纯化方法等问题还需要深入研究。

二、研究目的

本研究旨在构建一种肿瘤靶向性rhTNF-α/MMPs融合蛋白，并对其进行表达纯化及生物学活性鉴定，为该融合蛋白的进一步应用提供实验基础。

三、研究内容及方法

1.构建肿瘤靶向性rhTNF-α/MMPs融合蛋白的基因序列；

2.将基因序列克隆至表达载体中，进行原核表达体系的构建和优化；

3.通过IPTG诱导，利用Ni-NTA亲和柱法对融合蛋白进行表达纯化，并进行SDS凝胶电泳和Westernblot检测；

4.对纯化得到的融合蛋白进行生物学活性鉴定，包括细胞增殖、凋亡和肿瘤细胞迁移等实验。

四、预期结果

1.成功构建肿瘤靶向性rhTNF-α/MMPs融合蛋白基因序列并进行原核表达体系构建；

2.成功表达纯化肿瘤靶向性rhTNF-α/MMPs融合蛋白，并对其进行质量和活性检测；

3.肿瘤靶向性rhTNF-α/MMPs融合蛋白将具有较好的抗肿瘤生物学活性。