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DEK蛋白真核表达纯化及其活性检测的开题报告

一、课题研究背景

DEK蛋白（DEKprotein）是一种保守的核酸结合蛋白，在真核生物中广泛存在且多功能，参与了基因转录、DNA损伤修复、染色体结构的维持以及细胞周期调控等生物过程。近年来的研究表明，DEK蛋白与许多肿瘤的发生和发展有着密切的关系，如白血病、淋巴瘤、乳腺癌、胃癌、前列腺癌等，同时也与病毒感染如艾滋病毒的复制有关联。因此，研究DEK蛋白的功能机制及其与疾病的关系具有重要的科学价值和应用前景。

DEK蛋白的研究需要得到该蛋白的高纯度样品。目前，DEK蛋白的表达和纯化尚未得到广泛的应用和改进，因此仍需要对其表达和纯化方法进行优化和改进。同时，对于蛋白的功能研究，需要对其进行活性检测，以更好地了解其生物学活性及其与相关疾病的关系。

二、研究目的

本课题旨在建立DEK蛋白真核表达纯化的优化方法，通过对其纯化方法的改进，得到高纯度的DEK蛋白样品，并进行活性检测，以探究该蛋白的潜在功能和机制，为进一步研究其与相关疾病的关系提供基础。

三、研究内容

1.DEK蛋白真核表达重组质粒构建

2.DEK蛋白的真核表达方法优化

3.DEK蛋白的纯化方法的改进和优化

4.DEK蛋白的生物学活性检测

四、研究方法和技术路线

1.采用PCR扩增方法，从人类胚胎肾细胞中得到DEK蛋白的全长cDNA序列。

2.将DEK蛋白的全长cDNA序列克隆到真核表达载体中，并通过Westernblotting、定量PCR、荧光显微镜、CO-IP等方法，对不同组织、不同细胞类型、不同表达时间的重组质粒进行筛选，从而优化DEK蛋白的真核表达方法。

3.对产生了异位蛋白表达的细胞进行诱导扩增和大规模培养，然后采用组织磨碎和超声辅助的方法进行细胞裂解，最后通过离子交换和凝胶过滤柱进行DEK蛋白的纯化和检测。

4.利用荧光显微镜、Westernblotting、酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术方法对纯化后的DEK蛋白样本进行生物学活性检测。

五、研究预期成果及意义

1.建立DEK蛋白真核表达纯化的优化方法，得到高纯度的DEK蛋白样品。

2.对DEK蛋白的生物学活性进行检测，探究其在基因转录、DNA损伤修复、细胞周期等过程中的作用机制。

3.探讨DEK蛋白与肿瘤等相关疾病的关系，为开发新型治疗手段和治疗药物提供基础。

4.为相关研究提供高质量的实验数据和实验技术支持，并促进该领域的发展和进步。