人促红细胞生成素在cho细胞上的表达.pptx

人促红细胞生成素在CHO细胞上的表达 魏霄雲哈尔滨师范大学生命科学与技术学院生物制药;促红细胞生成素的理化性质;关于EPO;关于EPO;实验目的：;三、实验仪器及耗材;三、实验仪器及耗材;三、实验仪器及耗材;方法;网织红细胞计数;四·实验步骤;实验步骤;五·实验结果;实验结果;·2　瞬时表达结果;3　稳定表达;4　EPO体内生物活性的测定;六·讨论;对外源基因而言,也就是决定于特定的表达载体中的启动子,一个合适的启动子可将外源基因的表达水平提高几倍甚至几十倍。但是对于特定的基因和细胞,各启动子起始转录的效率有很大的差别,因此我们认为在进行外源基因的表达研究中,应考虑选用几种不同的强启动子,才有可能获得较为理想的表达效果。 目前外源蛋白在真核细胞中的稳定表达均采用了选择扩增系统,其中以二氢叶酸还原酶基因扩增系统研究最为清楚,应用最为广泛。 可以通过MTX的渐次加压选择而进行极大地增加外源基因的拷贝数,从而提高外源蛋白的产量。 ; 有关文献报道认为与dhfr基因共转染的DNA倾向于同它一起整合于细胞染色体的共同区域,当用MTX进行加压筛选时,它们将同时进行扩增。但我们的研究表明共转染时加压效果不明显,这可能是由于它们并未整合于染色体的相同位点所致。因此我们认为最好选用dhfr基因与目的基因串联在一起的载体来进行表达,加压效果较为明显。 我们的表达结果明显高于国内报道的水平,其原因可能是由于我们采用的是EPOgDNA,因为有关报道认为在其gDNA的内含子及基因两侧的非翻译区中存在一些对基因表达具调控作用的元件,它们的存在可明显提高基因在细胞中的表达量。同时我们采用的载体中dhdfr基因与EPO基因串联在一起,便于用MTX进行加压扩增。 ;谢谢！