GB/T 19915.5-2005猪链球菌2型多重PCR检测方法.pdf

CCIS5307.010.30 霭黔 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T 19915.5-2005 猪链球菌z型多重PCR检测方法 ProtocolofmultiplexPCRidentificationofStreptococcussuistype2 2005-09-27发布 2005-11-01实施 率督冒瞥臀瓣譬壕臀臀暴发“ GB/T19915.5-2005 前 片习 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由国家标准化管理委员会提出。 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。 本标准由中国检验检疫科学研究院负责起草。 本标准主要起草人：韩雪清、林祥梅、吴绍强、刘建、贾广乐、梅琳、陈国强、张敬友、姜众、唐泰山。 本标准为首次发布。 GB/T19915.5-2005 猪链球菌2型多重PCR检测方法 1 范围 本标准规定了猪链球菌2型多重PCR检测的操作方法。 本标准适用于检测生猪拭子、增菌培养物、疑似病料及猪组织样品 猪（淋巴结、扁桃体、肉品等）中的 猪源链球菌及猪链球菌2型。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单 不（包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 猪链球菌2型 Streptococcussuestype2 猪链球菌是属于链球菌属的一种细菌，根据其荚膜多糖抗原的差异，可分为 1-34及1/2共35个 血清型。猪链球菌2型是猪链球菌的一个血清型，不仅对猪致病性很强，而且可以感染特定的人群，是 一种重要的人畜共患病病原菌。 3.2 多皿聚合阵链式反应 多（皿PCR)multiplexpolymerisechainreaction 多重PCR又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系中加上两对以上引物，同时 扩增出多个核酸片断的PCR反应。 4 缩略语 本标准采用下列缩略语： PCR 聚合酶链式反应 DNA 脱氧核糖核酸 dNTP 脱氧核酸三磷酸 by 碱基对 5 试荆和材料 除另有规定外，所用生化试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682-1992的灭菌双蒸水或超纯水。 5.1 猪链球菌2型多重PCR反应混合物 PCR缓冲液 含（Mg),2fzL;dNTP,1.6IL；引物 1,0.6tLL；引物2,0.6IL；引物3,0.6ujL；引物 4,0.6fL；菌液 1.5IiL;酶0.2KL；水 12.3pL；总体积20IL, 5.2TaqDNA聚合酶 5.3 10XPCR缓冲液 100mmol/LKCI，160mmol/L （NH4)ZSO4，20mmol/LMgS04，200mmol/LTris-HCI GB/T19915.5-2005 (pH8.8)，1％TritonX-100，lmg/mLBSA, 5.4 dNTP混合液 各（2.5mmol/L) 5.5 琼脂糖：电泳级 5.6 澳化乙锭 5.7DNA分子量标准 5.8 TE缓冲液 10mmol/LTris-HCl(pH8.0)，1mmol/l.EDTA, 5.9 核酸电泳缓冲液 Tris碱242g，冰乙酸57.1mL,O.5mol/LEDTA100mL，加蒸馏水至1000mL，使用时10倍 稀释。 5.10 电泳加样缓冲液 0.