GB/T 19915.9-2005猪链球菌2型溶血素基因PCR检测方法.pdf

ICS07.100.30 一 一 C53 溥羚 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GBJT 19915.9-2005 猪链球菌2型溶血素基因PCR 检 测 方 法 Detectionmethodofthehemolysingenefor Streptococcussuistype2byPCR 2005-09-27发布 2005-11-01实施 率督留瞥臀瓣譬篷臀臀暴发“ GB/T19915.9-2005 Hii 青 猪链球菌2型是链球菌属的成员，其致病菌株可致猪链球菌病，引起猪败血症、脑膜炎等。近年来， 随着我国养猪业的发展，该病流行日趋严重，给养猪业带来巨大损失。人可通过伤口感染该菌，并导致 死亡。溶血素是猪链球菌2型一种重要毒力因子。通过检测猪及其产品中分离菌株是否含有猪链球菌 2型溶血素基因，可以作为区分猪链球菌2型无毒菌株与致病菌株的一个指标，特制定本标准。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由国家标准化管理委员会提出。 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。 本标准主要起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：陈国强、唐泰山、张敬友、姜众、王凯民、张常印、林祥梅、吴绍强、刘建、韩雪清、 贾广乐、梅琳。 GB/T19915.9-2005 猪链球菌2型溶血素基因PCR 检 测 方 法 1 范围 本标准规定了猪链球菌2型溶血素基因PCR检测的操作方法。 本标准适用于猪及其产品中分离菌株的猪链球菌2型溶血素基因的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件，其随后所有 的修改单 不（包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 猪链球菌2型 Streptococcussuistype2 猪链球菌是属于链球菌属的一种细菌，根据其荚膜多糖抗原的差异，可分为1^34及 1/2共35个 血清型。猪链球菌2型是猪链球菌的一个血清型，不仅对猪致病性很强，而且可以感染特定的人群，是 一种重要的人畜共患病病原菌。 4 缩略语 PCR polymerasechainreaction,聚合酶链式反应 DNA deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸 dNTP deoxyribonucleosidetriphosphate，脱氧核昔酸三磷酸 by basepair，碱基对 5 测定方法 5.1方法提要 以可疑细菌培养物提取的核酸，作为DNA模板进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，与 标准分子量标记比较，来确定扩增产物的大小。 5.2 试剂和材料 除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682-1992的灭菌双蒸水。 5.2.1 猪链球菌2型溶血素基因PCR反应混合物：10XPCR缓冲液 2.5KL,25mmol/LM9Cl2 2.0p.L,2.5mmol/LdNTP2uL、上下游引物各1