全人源抗人肿瘤坏死因子单克隆抗细管等电聚焦鉴别方法的建立及验证.pdf

中国生物制品学杂志2016 年12 月第29 卷第12 期 Chin J Biologicals December 2016 ，Vol. 29 No. 12 · · 1301 ·技术方法 · 全人源抗人肿瘤坏死因子- α单克隆抗体 毛细管等电聚焦鉴别方法的建立及验证 杨兰兰，张银川，吴小丽，张雅婷，桂芳，吴师师，闭兰，潘勇兵 武汉生物制品研究所有限责任公司抗体研究室，湖北武汉430207 摘要：目的 建立用于全人源抗人肿瘤坏死因子-α （tumor necrosis factor-α ，TNF-α）单克隆抗体鉴别的毛细管等电聚 焦（capillary isoelectric focusing ，cIEF）方法，并进行验证。方法 通过优化cIEF 过程中各关键实验参数，如阴极稳定 剂浓度、阳极稳定剂浓度、两性电解质浓度、3-10 与8-10. 5 两性电解质比例、聚焦时间、聚焦电压，建立cIEF 方法，并 对方法的专属性、重复性、中间精密度进行验证。结果 确定cIEF 方法的实验参数为：阴极稳定剂浓度30 mmol ／ L ， 阳极稳定剂浓度3. 2 mmol ／ L ，3- 10 两性电解质在样品溶液中体积比为6. 0% ，聚焦电压为25 kV ，聚焦时间为 10 min。保护剂在样品出峰时间无紫外吸收峰，阳性对照阿达木单抗与样品出峰时间及峰形一致，阴性对照利妥昔 单抗生物类似药、贝伐珠单抗、曲妥珠单抗生物类似药、西妥昔单抗与样品出峰时间及峰形均不一致，且对样品无 干扰；样品制备重复性主峰等电点的相对标准差（relative standard deviation ，RSD）为0. 114% ，中间精密度RSD 为 0. 837% 。结论 建立的cIEF 方法pH 梯度和精密度良好，专属性较强，适用于制品的批放行鉴别试验。 关键词：毛细管等电聚焦；肿瘤坏死因子-α ；单克隆抗体；鉴别 中图分类号：R392-33 文献标识码：A 文章编号：1004-5503 （2016）12-1301-07 DOI:10.13200/ki.cjb.001559 Development and validation of capillary isoelectric focusing method for identification of fully human anti-tumor necrosis factor-α monoclonal antibody YANG Lan-lan, ZHANG Yin-chuan, WU Xiao-li, ZHANG Ya-ting, GUI Fang, WU Shi-shi, BI Lan, PAN Yong-bing Wuhan Institute of Biological Products Co., Ltd., Wuhan 430207, Hubei Province, China Corresponding author: PAN Yong-bing, E-mail: yongbingpan@163.com Abstract ：Objective To develop and validate a capillary isoelectric focusing （cIEF）method for identification of fully