DB32T 2736-2015 铁皮石斛无菌播种苗生产技术规程 .docx
ICS65.020.20B31
备案号：44814-2015DB32
江苏省地方标准
DB32/T2736-2015
铁皮石斛无菌播种苗生产技术规程
TechnicalcodeforproducingasepticseedlingsofDendrobiumofficinalekimuraetMigo
2015-02-15发布2015-04-15实施
江苏省质量技术监督局发布
DB32/T2736-2015
I
前言
本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》编制。本标准由苏州神元生物科技股份有限公司提出。
本标准起草单位：苏州神元生物科技股份有限公司、苏州市铁皮石斛研究院。
本标准起草人：滕士元、史骥清、郭传敏、赵锋、时剑、孙贺、王译、侯森广、张琳琳。
DB32/T2736-2015
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铁皮石斛无菌播种苗生产技术规程
1范围
本标准规定了铁皮石斛无菌播种苗生产环境的消毒灭菌、培养基配制、培养条件调控、无菌播种苗生产工艺流程，以及商品苗的质量分级、包装、运输等。
本标准适用于铁皮石斛无菌播种苗的生产。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
NY/T2306-2013花卉种苗组培快繁技术规程
LY/T1882-2010林木组织培养育苗技术规程
3术语和定义
本标准采用下列定义。3.1
铁皮石斛无菌播种苗asepticseedlingsofDendrobiumofficinalekimuraetMigo
以铁皮石斛成熟蒴果的种子通过组织培养方法，在培养基上进行无菌播种、培养获得的种苗。3.2
萌发培养cultureofgermination从种子播种，萌发出新叶的培养过程。
3.3
生长培养cultureofgrowth
萌发培养结束，将幼苗稀开转接至生长培养基，形成植株的培养过程。3.4
生根培养cultureofrooting
生长培养结束，将幼苗再一次稀开转接至生根培养基，形成根系，成为成品苗的培养过程。4生产场地与设备
按照NY/T2306-2013中的规定执行。
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5容器和器械清洗
容器采用650ml兰花组培瓶。清洗按照NY/T2306-2013中的规定执行。
6培养基配制和贮存
按照NY/T2306-2013和LY/T1882-2010中的规定进行。其中固化剂（琼脂等）可以采用粉末状，不需先加热溶化，和其它配制溶液混合均匀，在分装机内定容后，pH调整至5.7~5.8。边均匀搅拌、边分装。
7灭菌、接种、培养室操作
按照NY/T2306-2013中的规定执行。
8无菌播种苗生产流程
8.1无菌播种苗生产流程图参见附录A。
8.2蒴果的采集及处理
8.2.1采集地选择
采集地周围1km范围内应无其它种类石斛。
8.2.2采收和保存
经自然或人工授粉后，蒴果开始转黄时，选择饱满的果实连茎一起采收，采收后放于阴凉干燥处备用。
8.2.3蒴果处理
取完整的蒴果在超净工作台上切除果柄和花蒂，按照NY/T2306-2013中的规定执行灭菌。灭菌后的蒴果在超净台上晾干，当天播种。
8.3萌发培养
将灭菌的蒴果，置于无菌滤纸上，在蒴果花蒂端切开一小口，用镊子夹住花柄端在培养瓶瓶口轻轻抖动，边抖动边转动培养瓶，将种子均匀地播撒于萌发培养基表面。一个蒴果接种5~8瓶。
接种后的培养瓶放于培养室，前3d为暗培养，第4d始光照强度为14.4~18μmol·m-2·s-1，第7d后光照强度增加至27~36μmol·m-2·s-1，光照时间为12h/d；温度25±3℃;培养60~90d。
8.4生长培养
幼芽长至1~3mm时转接至生长培养基中进行培养，每瓶150~200株。
转接后的培养瓶放于培养室，光照强度为36~72μmol·m-2·s-1，光照时间为12h/d；温度为25±3℃;培养60~90d。
8.5生根培养
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幼苗长至1~1.5cm时转接至生根培养基中进行培养，每瓶20~40株。转接后的培养瓶放于培养室，培