第十三章多肽与蛋白质类药物.ppt

二、主要蛋白质类药物的制备 （一）白蛋白 1、结构与性质 白蛋白为单链多肽，由575aa组成，65KDa，pI4.7，可溶于水和半饱和硫酸铵溶液；对酸较稳定；加入NaCl可提高其热稳定性。 从人血浆中分离的白蛋白有两种制品：一是从健康人血浆中分离制备的，称为血清白蛋白；另一是从孕妇胎盘血中制备的，称胎盘血白蛋白。 血浆白蛋白制剂是淡黄色略粘稠的澄清液体或白色疏松状（冻干）固体。 2、生产工艺 （1）工艺路线 （2）工艺过程 ①络合（利凡诺沉淀） 人血浆在搅拌下用碳酸钠溶液 调pH8.6，再加入等体积2%利凡诺溶液，充分搅拌后静置2-4h，分离上清和沉淀（上清可供生产人丙种球蛋白）。 ②解离 沉淀溶于蒸馏水，用0.5M HCl调pH到弱酸性，加0.15%-0.2%的NaCl，不断搅拌解离。 ③加温 充分解离后，加热到65℃恒温1h，立即冷却。 ④分离 冷却液离心，离心液再压滤，得澄清液。 ⑤超滤 澄清液用超滤器浓缩。 ⑥热处理 浓缩液在60℃恒温处理10h。 ⑦澄清和除菌 压滤澄清，再用冷灭菌系统灭菌。 ⑧分装 检查合格后分装。 3、检验方法：颜色、溶解时间、水分、pH、白蛋白含量、残余硫酸铵含量、无菌试验、安全性试验等。 4、作用与用途（略） （二）干扰素 1、结构与性质 是一类细胞因子，有提高免疫力功能，分为α、β、γ三型，同一型别，根据氨基酸的序列差异，又可分为若干亚型；三种型别的干扰素的理化和生物学性质有差异，具体见p311表13-8。 2、生产工艺 （1）工艺路线 （有从血浆白细胞中分离的方法和基因工程的方法） （2）工艺过程 ①分离灰黄层 取健康人血液，离心分离，吸取灰黄色层，置4℃冰箱。 ②氯化铵处理 灰黄色层为白细胞层，用0.83%氯化铵处理，以除去残存的红细胞。用培养液培养，记数并细胞密度调为107个/ml。 ③启动诱生 加入白细胞干扰素，终浓度为100u/ml，置37℃水浴培养2h。 ④正式诱生 加入仙台病毒，终浓度为100-150血凝单位/ml，在37℃搅拌培养过夜。 ⑤收获 次日晨将培养物离心，上清液即是粗制干扰素。 ⑥纯化 粗制品中加入KSCN至0.5M，用HCl调pH3.5；离心，弃上清；沉淀加冷乙醇，离心、弃沉淀；上清用HCl调pH5.8，离心，上清和沉淀分别处理均可得干扰素纯品。 3、检验方法 效价测定法（见p313） 4、作用与用途（p313，自己看看） （三）胰岛素 1、结构与性质 由51aa组成，有A、B两条链；A链含21个氨基酸，B链含30个氨基酸；两条链之间由两个二硫健相连，在A链内还有一条二硫健；胰岛素的同源性很高。胰岛素原是一条链，加工去掉一段C肽，形成三个二硫健后，即成为有活性的胰岛素。 胰岛素的性质有： ①白色结晶粉末；②分子量约为5.7KDa，pI为5.30-5.35； ③在pH4.5-6.5几乎不溶于水，易溶于稀酸、稀碱； ④在弱酸性溶液中稳定；⑤在水溶液中能产生聚合和解聚现象； ⑥具有蛋白质的一切化学性质；等等。 2、生产工艺：主要有酸醇法和锌沉淀法；下面介绍酸醇法 （1）工艺路线 （2）工艺过程 ①提取 冻胰块刨碎，用一定浓度的乙醇和草酸提取两次，提取液合并。 ②碱化、酸化 提取液用氨水调pH8.0-8.4，压滤；滤液用硫酸酸化至pH3.6-3.8，5℃静置4h以上，离心，取上清。 ③减压浓缩 上清减压浓缩（过程中沉淀弃掉）。 ④去脂、盐析 浓缩液去脂；盐酸调pH2.3-2.5，27%（W/V）NaCl盐析，得粗品胰岛素。 ⑤精制 除酸性蛋白、锌沉淀、结晶，得到精品胰岛素。 ⑥回收 从精制过程的酸性蛋白沉淀中可以回收部分胰岛素。 3、说明和讨论 （1）原料质量和预处理问题：注意保持腺体组织完整、胰尾部分要保留、取新鲜胰 脏并速冻。 （2）浓缩：浓缩过程尽量控制温度不要太高，时间要短。 （3）产品纯度：要严格控制胰岛素原和其它杂蛋白的含量，是很重要的质量指标。 （4）胰岛素制剂：胰岛素制剂分类是按照作用时间来分的，分为速效、中效和延效三种。 （5）胰岛素结构修饰：通过结构改造，提高胰岛素的效价和利用度。 （6）酶促半合成人胰岛素： （7）重组DNA技术制造人胰岛素（略） 4、检验方法：外观和效价 5、作用与用途： 胰岛素是调节血糖水平的重要激素，能使血糖降低，主要治疗： （1）胰岛素依赖性糖尿病； （2）糖尿病合并感染、妊娠、创伤和甲状腺功能亢进、抗体对胰岛素需要量增加者； （3）糖尿病昏迷和酮症酸中毒；