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应用无细胞系统表达恶性疟原虫环子孢子蛋白.pdf

发布:2017-08-16约字共7页下载文档
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应用无细胞系统表达恶性疟原虫环子孢子蛋白 1 2 2 2 1 韩静 ,杨英超 ,辛晓芳 ,王国治 ,叶嗣颖 (1. 华中科技大学同济医学院病原生物系,武汉,430000; 2.中国药品生物制品检定所,北京 100050) 孢子捕捉器/ 摘要 目的:应用麦胚无细胞蛋白表达系统,表达出恶性疟原虫环子孢子 蛋白(Circumsporozoite protein, CSP )。方法:依据PlasmoDB 查得的恶 性疟原虫 Pf3D7 株 CSP 蛋白基因序列,设计一对引物,经 PCR 扩增出 C SP 蛋白基因全序列。用 NcoI 与 Sma I 双酶切后,与同样双酶切的 pIVE X 1.3WG 载体连接,转化大肠杆菌 DH5 а株,获得pIVEX WG 1.3-CSP 质粒。将 pIVEX WG 1.3-CSP 质粒加入到麦胚表达系统进行表达,表达 产物使用镍离子亲和层析柱纯化,获得重组 CSP 。结果:PCR 成功扩增 出CSP 基因序列,成功构建 pIVEX WG 1.3-CSP 质粒,经 WB 验证,该 重组质粒在麦胚表达系统中成功地表达了 CSP 。结论:使用麦胚系统表达 的CSP,可用于疟疾诊断试剂和疫苗评价方面的研究。 关键词:恶性疟原虫;环子孢子蛋白;麦胚无细胞表达系统;疟疾疫苗 Key words: Plasmodium falciparum ;Circumsporozoite protein ;Wheat G erm Cell-Free System ;Malaria vaccine 疟疾是一种严重危害人类健康的重要全球性虫媒传染病,根据世界卫 生组织2008 年全球疟疾报告报道,2008 年全世界有2. 43 亿临床病例,86. 3 万人死于疟疾 [1 ] 。非洲儿童每年平均罹患疟疾 1.6~5.4 次,儿童期死亡 者中,有五分之一是由疟疾造成的,每 30s 就有一名儿童因疟疾而死亡[2 ] 。 课题项目:国家传染病防控相关产品评价技术平台(2009ZX10608) 作者:韩静,E-mail:hanjing_54@sina.con 在我国,由于防控工作得力,疟疾年发病率已从 50 年代的 126.41/1 [3] 0 万降至 2000 年的 1.94/10 万 ;除海南和云南两省之外,其它各省已 基本消除恶性疟[4] 。2000 年之后,我国疟疾疫情又出现了回升的态势, 疟疾防控形式依然严峻。疟疾的治疗,现在一般是采取截断传染源和药物 治疗。随着疟原虫对抗疟药以及蚊媒对杀虫剂抗性的产生和扩散,特别是 多重抗药性的恶性疟不断的扩散[5 ] , 疟疾防治面临越来越大的困难,研 制有效的疟疾疫苗进行疟疾防治已受到越来越多研究者的重视,并已成为 研究热点。近年来疟疾疫苗的研制取得了较大的发展, 目前已有35 个候选 疫苗进入了临床试验[6 ],其中葛兰素史克生物公司及Walter ReedArmyIn stitute of Research 共同研制的 RTS ,S/ AS02 在临床试验中取得了新的 进展,Ⅰ/ Ⅱ临床试验结果显示,该疫苗在人体中是安全的,并能产生强免 疫反应[2] 。疟疾疫苗主要分为抗红前期原虫疫苗、抗红内期原虫疫苗和传 播阻断疫苗。其中环子孢子蛋白(CSP)被认为是抗红前期原虫疫苗的一个 [7] 重要的抗
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