第06章核苷酸与核酸.ppt

第 六 章核苷酸与核酸Nucleotides and Nucleic Acids （一）核酸中的碱基 体内重要的游离核苷酸及其衍生物 含核苷酸的生物活性物质： NAD+、NADP+、CoA-SH、FAD 等都含有 AMP 3?, 5?-磷酸二酯键 （四）某些DNA 具有更复杂的螺旋结构 H-DNA的结构 2．4条多聚鸟嘌呤核苷酸链形成四螺旋DNA 回文结构：反向重复序列 1、中线水平回折1800： 5’-TTAGCACCACGATT-3’ 3’-AATCGTGGTGCTAA-5’ 2、水平回折： 5’-TTAGCACGTGCTAA-3’ 3’-AATCGTGCACGATT-5 3、部分回折： 5’-TGCGATACTCATCGCA-3’ 3’-ACGCTATGAGTAGCGT-5’ 碱基序列依赖性的局部DNA 可形成发夹形或十字形结构 三、真核生物DNA与组蛋白组成高度有序的染色体 （一）核小体(nucleosome) 是染色质的基本组成单位， 由DNA和蛋白质构成 。 端粒酶 四、DNA是遗传的物质基础 （一） tRNA分子含有较多稀有碱基 74~95个核苷酸组成， 含 10~20% 稀有碱基，如 DHU 具有 T?C (?:假尿嘧啶核苷) 3′末端为 — CCA-OH 5′末端大多数为G 近几年生命科学研究的热点，2001-2003年Science杂志连续将siRNA、miRNA、RNA干扰方面的研究评为十大科技突破。 siRNA和miRNA调控基因表达，影响细胞的许多功能，使人们重新认识RNA分子在细胞进化和功能作用的地位以及广泛的应用前景。 （二）碱基在体液环境中以碱性解离为主 （三）核酸分子是酸性化合物 核酸为多元酸，具有较强的酸性。 可与金属离子成盐，不溶于乙醇或异丙醇 三、核酸溶液有高分子性质 粘度 ：DNA RNA、 dsDNA ssDNA 粘度大，易断裂。 沉降系数： 不同空间结构，沉降速率不同； 线性 环状 超螺旋的DNA； 超速离心分离。 四、核酸有紫外线吸收的特性 核酸的紫外吸收：OD260 单核苷酸 ssDNA（或RNA） dsDNA 2. 具有同源序列的核酸分子可相互杂交 核酸分子杂交（hybridyzation）： 不同来源，但具互补序列的核酸，按碱基配对原则形成杂化双链的过程。 杂化双链：DNA与DNA分子， DNA与RNA分子， RNA与RNA分子间形成。 第 五 节核 酸 酶 Nucleases  （二）按对底物作用方式不同分类 核酸内切酶：限制性核酸内切酶 非特异性限制性核酸内切酶。 核酸外切酶：5?→3?或3?→5?核酸外切酶。 （三）按对底物二级结构的专一性分类 双链酶：作用于双链核酸 单链酶：作用于单链核酸 二、核糖核酸酶是一类RNA内切酶 （一）胰核糖核酸酶(RNase1): 嘧啶核苷酸 （二）RNaseT1: 鸟嘌呤核苷酸 （三）RNaseT2: 腺嘌呤核苷酸 三、脱氧核糖核酸酶是一类DNA消化酶 （一）胰DNaseⅠ：切割单链/双链，产物DNA是5?-磷酸末端的寡聚核苷酸 （二）脾DNase Ⅱ：产物是3?-磷酸末端的寡聚核苷酸 （三）BAL 31 核酸酶：DNA外切酶活性为主。 （四）限制性内切核酸酶：具有位点特异性。 四、N-糖苷酶可移去碱基　 N-糖苷酶（glycosidase）： 水解核苷酸的N-糖苷键，切除核苷酸的碱基。 有碱基特异性或非特异性的糖苷酶。 　 第六节 重要的核酸分离、分析技术 Techniques for Isolation and Identification of Nuclear Acids 一 、分离核酸有多种方法 （一）酚抽提法是分离核酸的基本方法 1．酚抽提法可抽提DNA 2．酚抽提法也可提取RNA （二）超速离心可分离核酸 （三）凝胶电泳法分离核酸很常用 （四）层析法分离核酸与分离蛋白质原理基本相同 1．亲和层析法分离特异核酸 2．凝胶过滤层析又称分子筛过滤 二、两种方法常用于核苷酸序列测定 （一）Sanger法又称双脱氧终止法 （二）Maxam和Gilbert法是化学裂解测序 （三）tRNA序列分析比DNA测序更复杂