越橘谷胱甘肽巯基转移酶基因的克隆及表达-吉林农业大学学报.pdf

吉林农业大学学报　 ２０１７，３９（４）：４２３～４３１ ｈｔｔｐ：／ ／ ｘｕｅｂａｏ．ｊｌａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｊｌｎｄｘｂ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ 越橘谷胱甘肽巯基转移酶基因的克隆及表达∗ 刘禹姗，陈　 丽，邓　 宇，蔡　 莉，李亚东，孙海悦∗∗ 吉林农业大学园艺学院，长春 １３０１１８ 摘　 要：以越橘（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ Ｌ．）品种“北陆”为试材，采用反转录ＰＣＲ克隆技术成功克隆越橘谷胱甘肽巯基转 移酶基因ｃＤＮＡ全长序列，获得一个完整的编码区ｃＤＮＡ 序列，长为６９０ ｂｐ，编码２２９ 个氨基酸，将其命名为 ＶｃＧＳＴＵ１（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＫＴ６０１０６４）。 经与谷胱甘肽巯基转移酶家族其他成员的氨基酸序列比对和系统进 化分析，初步确定ＶｃＧＳＴＵ１属于谷胱甘肽巯基转移酶Ｔａｕ 家族。 生物信息学分析表明，该蛋白不稳定指数为 ２８８０，属于稳定蛋白。 预测该蛋白分子量为２５４９９ ｋｕ，等电位点为５６８。 蛋白质序列同源比对发现其含有 － － － － － 完整的ＧＳＴ Ｎ Ｔａｕ和ＧＳＴ Ｃ Ｔａｕ结构域。 利用反转录ＰＣＲ和实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ ＰＣＲ）２种方法分析 谷胱甘肽巯基转移酶的表达模式，该基因在越橘的根、茎、叶芽、叶、花芽、绿果、粉果、蓝果、蓝果果皮、蓝果种 子中均有表达，且在蓝果种子中相对表达量最高。 关键词：越橘；花青素；谷胱甘肽巯基转移酶；基因克隆；基因表达 中图分类号：Ｓ６６３９　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 文章编号：１０００⁃５６８４（２０１７）０４⁃０４２３⁃０９ ＤＯＩ：１０．１３３２７／ ｊ．ｊｊｌａｕ．２０１７．２９６４ 引文格式：刘禹姗，陈丽，邓宇，等．越橘谷胱甘肽巯基转移酶基因的克隆及表达［Ｊ］．吉林农业大学学报，２０１７， ３９（４）：４２３⁃４３１． Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｓ⁃ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ ＬＩＵＹｕｓｈａｎ，ＣＨＥＮ Ｌｉ，ＤＥＮＧＹｕ，ＣＡＩ Ｌｉ，ＬＩＹａｄｏｎｇ，ＳＵＮ Ｈａｉｙｕｅ∗∗ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３０１１８，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｓ⁃ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ （ＧＳＴ） ｇｅｎｅ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｆｒｏｍ － ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ ｃｕｌｔｉｖａｒ “Ｎｏｒｔｈｌａｎｄ” ｂｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ＰＣＲ （ＲＴ ＰＣＲ） ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｉｔ ｗａｓ ｎａｍｅｄ ＶｃＧＳＴＵ１． Ｔｈｅ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＶｃＧＳＴＵ１ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ ｉｓＫＴ６０１０６４． Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ＶｃＧＳＴＵ１ｗａｓ６９０ ｂｐ ａｎｄ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ｏｆ ６９０ ｂｐ． Ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄＶｃＧＳＴＵ１ｐｒｏｔｅｉｎｈａｄ２２９ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｗｉｔｈａｎｅｓｔｉｍａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｏｆ２５４９９ｋｕａｎｄ ａｎ ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｐｏｉｎｔ ｏｆ ５６８． Ｔｈｅ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｎｄｅｘ （Ⅱ） ｏｆ ＶｃＧＳＴＵ１ ｗａｓ ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｔｏ ｂｅ ２８８０． Ｔｈｉｓ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｓ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓ ｓｔａｂｌｅ． Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｈｏｗｅｄ