免疫组织化学原理及应用12级-图文.ppt

免疫组织化学的原理 及应用 孙勤暖 组织学与细胞学、组织化学、生物化学、免疫组织化学 组织学、细胞学与组织化学区别： 1、组织、细胞学是研究形态结构与功能的关系 2、组织化学是研究组织细胞内的化学成分及其含量或酶的存在及其活性 组织化学概念: = 细胞化学 是运用物理、化学、免疫学和分子生物学等原理，对组织与细胞化学成分或酶活性进行定性、定位和定量的研究的科学。 传统组织化学概念： 是运用物理、化学 免疫学、电镜技术和分子生物学技术的发展免疫组织化学、免疫电镜组织化学、原位杂交技术等 广义组织化学包括： 传统组织化学、 免疫组织化学、 电镜组织化学、 免疫电镜组织化学、 原位杂交组织化学等 生物化学与组织化学区别： 生物化学： 1、运用化学原理分析细胞的组成成分以及这些成分在生命过程中的化学反应。 2、生物化学将组织细胞制成匀浆研究（结构被破坏） 3、生物化学的化学反应在试管内或容器内 4、生物化学的化学反应结果观察不用显微镜 5、产物需要分离、提纯、鉴定。 组织化学： 运用化学反应原理在组织细胞内对组织细胞化学成分进行定性、定位和定量的研究。产物多需要显色剂显示。如：利用酶的特性 一、免疫组织化学技术的基本原理： 免疫组织化学技术是利用抗原与抗体能特异性结合的基本特点，通过显示剂的显示,确定某些抗原或抗体的有无或其存在的位置，来研究某事物的特性。 二、组织化学与免疫组织化学技术的区别 组织化学技术： （HE 特殊染色） 通过应用某些能与组织、细胞化学成分特异性结合的显色试剂，定位的显示组织、细胞的特殊化学成分的一门技术。 优点：既保存原有的形态改变又显示特殊化学成分达到形态、功能与代谢相结合。 （不敏感、特异性差） 二、组织化学与免疫组织化学技术的区别 免疫组织化学技术： 将抗原、抗体反应的特异性与组织化学反应的可见性结合在一起，形成了免疫组织化学技术。 优点： 1、形态、功能与代谢相结合（微量） 2、检测的成分更加广泛、敏感、特异性更强 三、免疫组织化学技术的发展 免疫荧光技术→ 抗体酶标法→ 多克隆抗体技术→ 单克隆抗体技术→ ABC法、S-P法等→ 原位杂交及原位PCR等免疫组化法。 四、免疫组织化学技术的优点 1、特异性强 2、敏感性高 3、定位准确 4、形态、功能与代谢相结合 五、 免疫组织化学方法 免疫组织化学 Immunohistochemistry Immunocytochemistry 1、特异性的抗原和特异性的抗体（结合） 2、显色系统 显示剂：酶,金属原子, 荧光分子 同位素分子 酶底物：DAB(3,3-二胺基联苯胺) AEC(3-氨基-9-乙基卡巴唑) 坚牢蓝，坚牢红. （一）直接法:酶标法（一步法） 将酶（HRP）标记在特异抗体上，方法简捷, 需要标记所有抗体 Ag Ab-HRP . 底物-显色剂显色 （一）直接法:酶标法（一步法） 将酶（HRP）标记在特异抗体上，方法简捷, 需要标记所有抗体. .Ag←Ab-HRP （一）直接法:酶标法（一步法） 将酶（HRP）标记在特异抗体上，方法简捷, 需要标记所有抗体. .Ag←Ab-HRP ↓ Ag—Ab-HRP （一）直接法:酶标法（一步法） 将酶（HRP）标记在特异抗体上，方法简捷, 需要标记所有抗体. .Ag←Ab-HRP ←底物-显色剂显色 ↓ Ag—Ab-HRP （一）直接法:酶标法（一步法） 将酶（HRP）标记在特异抗体上，方法简捷, 需要标记所有抗体. .Ag←Ab-HRP ←底物-显色剂显色 ↓ Ag—Ab-HRP—底物-显色剂显色 需要标记所有抗体 （二）间接法:二步法 将酶（HRP）标记在第二抗体上， . Ag Ab1 Ab2-HRP 底物-显色剂显色