SRY盒基因在斑马鱼和胡子鲇中的保守性分析 The Conservation Analysis of SRYbox Genes in Clari.pdf

遗传HEREDITAS(Beijing)18(1):1-31996 ·遗 传 快 报 · SRY盒基因在斑马鱼和胡子鱿中的保守性分析① 周荣家② 余其兴 程汉华 武（汉大学生命科学学院，武汉430072) 摘 要 本文采用人类SRY基因探针，与EcoRI消化的中国的胡子M(Clariasfuscus)和美国的斑马鱼 (Brachydaniorerio)基因组DNA进行了Southern印迹杂交分析．首次在这两种鱼中发现了SRY盒基因 及其存在特征；在斑马鱼中发现了明显的限制性片段长度多态性；并深人分析了SRY盒基因的进化保 守性。 关键词 SRY盒，鱼类，RFLP TheConservationAnalysisofSRY-boxGenesin ClariasfuscusandBrachydaniorerio ZhouRongjia YuQixing ChengHanhua (CollegeofLifeSciences,WuhanUniversity,Wuhan430072) AbstractUsing Southern bloting analysis,EcoRI-digested gcnomicDNA from Clarias瓜Scus andBrachydanioreriowerehybridizedtohumanSRYprobe.Hybridizationoccurredinbothmaleand femaleofthetwospecies.RFLPassociatedwithSRY-boxgeneswasobservedinBrachydaniorerio.The conservationofSRY-boxgeneswasanalysed. Keywords SRY-box,Fishes,RFLP 在人类和哺乳类，性别决定是由Y染色体上的一个基因所控制，存在这个基因，胚胎的性腺就发育成辜 丸，进 一步分化发育成男雄（）性，无此基因，则发育成卵巢，胚胎进一步分化发育成女雌（）性．这个基因早已称 为肇丸决定因子(T（DF)，并位于人类Y染色体短臂近于拟常染色体边界区．经过了三十多年的研究，通过对 Bkm,H-Y到ZFY等TDF候选基因的逐步认识，直到 1990年，才由Sinclair等克隆到人类Y染色体该区域内 的一个新的侯选基因SRY(Sex-determiningregionY)M ，同时在小鼠Y染色体相应区域找到了类似基因 Sry。（．经过SRY转基因小鼠实验及对SRY表达特征和保守性分析证实，SRY基因就是TDF(4-6)。 SRY基因具有高度进化保守性，在其它较广泛的物种中也发现了SRY的同源基因，包括果蝇，两栖类，鸟 类，北美鱼和其它哺乳动物 2〔,’·，“．这些基因的共同特点是具有SRY基因的HMG盒基序，现已统称这类基 因为SRY盒基因(SRY-box)或者SOX基因．SRY盒基因的发现及其保守性为性别决定机制等的研究提出了新 的研究课题．鱼类约占脊椎动物种数的一半，在生命科学特别是遗传及进化等研究中具有独特地位．鱼类SRY 盒基因的存在和保守性以及与人和哺乳类是否存在着联系，则有待研究．据此，我们选择了中国的胡子鱿和美国 ①国际人类前沿科学组织I（HFSPO)，中国博士后科学基金和武汉市青年科技晨光计划资助项目． ②周荣家，男，34岁，博七学位，专业为动物分子及发育遗传学． 2 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1996 18卷 的斑马鱼，探讨了SRY盒基因在这两种鱼中的保守性． 1材 料 和 方 法 1.1材 料 BS-SRY探针一为含人SRY保守区在内的0.8kbDNA片段的重组质粒，由法国Berta博士惠赠。胡子稣购 自南宁市集贸市场．斑马鱼由美国Lau博士提供．内切酶等工具酶购自BRL公司，随机引物标记药盒购 自 Promega公司，基因纯化药盒购自BIO101公司，Ca-32P)dCTP购自Amersham公司。 1.2方 法 1.2.1基因组DNA的提取与纯化 抽取胡子贴血液，ACD抗凝，离心收集细胞；斑马鱼全鱼经液氮冻凝后，扎碎、匀浆．