《醇脱氢酶活力的测定》.pdf

ICS07.080

CCSA40

团体标准

T/CAB

醇脱氢酶活力的测定分光光度

法

Determinationoftheactivityof

alcoholdehydrogenase—

Spectrophotometricmethod

（征求意见稿）

20XX-XX-XX发布20XX-XX-XX实施

中国产学研合作促进会发布

T/CAB

醇脱氢酶活力的测定分光光度法

1范围

本文件描述了测定醇脱氢酶活力的分光光度法。

++

本文件适用于生化试剂、工业酶制剂中依赖辅酶NAD或NADP的醇脱氢酶活力的测

定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期

的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

醇脱氢酶活力单位alcoholdehydrogenaseactivityunit

在30℃、pH8.5的条件下，每分钟氧化1μmol乙醇生成乙醛所需的酶量为一个酶活力单

位，单位为U。

4原理

醇脱氢酶催化底物乙醇的氧化生成乙醛，此过程依赖于尼克酰胺辅酶NAD(P)+，

+-1-1

NAD(P)在340nm下无吸收，而NAD(P)H有吸收，其ε=6.22mMcm，通过监测340nm

340

下吸光度的变化来测定NAD(P)H的生成从而计算乙醇的消耗速率，计算酶活力。

5试剂

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

5.1乙醇：CAS号64-17-5，纯度≥99.8%。

5.2尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）：CAS号53-84-9，纯度≥98%。

1

T/CAB

5.3尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）：CAS号24292-60-2，纯度≥97%。

5.4三羟基甲基氨基甲烷（Tris）-HCl缓冲液：50mmol/L，pH8.5。

++

5.5反应底物溶液：含100mmol/L乙醇、1mmol/LNAD或NADP、以及50mmol/L三

羟基甲基氨基甲烷（Tris），pH8.5。

++

使用分析天平准确称取0.46g乙醇、66.3mgNAD或78.7mgNADP溶解在100mL的

Tris-HCl缓冲液（5.4）中，充分混匀，现用现配。

6仪器设备

6.1分析天平：感量为0.01mg。

6.2pH计：精度为0.01。

6.3紫外