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眼斑水龟微卫星标记的特异性引物及检测方法
眼斑水龟微卫星标记的特异性引物及检测方法
本发明公开了一种眼斑水龟微卫星标记的特异性引物及检
测方法。以眼斑水龟基因组DNA为模板，使用本发明的微卫
星标记的特异性引物PCR扩增微卫星位点序列，然后对PCR
扩增产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，根据检测结
果对微卫星位点进行多态性分析。本发明提供的眼斑水龟微
卫星标记的特异性引物及检测方法可应用于眼斑水龟的遗
传多样性水平评估、种群遗传结构分析、亲缘关系鉴定等领
域。
【专利说明】眼斑水龟微卫星标记的特异性引物及检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于分子标记【技术领域】，具体涉及一种眼
斑水龟微卫星标记的特异性引物及检测方法。
【背景技术】
[0002]眼斑水龟(Sacaliabealei)隶属于龟鳘目眼斑龟属，
是中国特有种,主要分布于广东、广西、福建、安徽、江西、
贵州、香港等地，生活在山区溪流中。眼斑水龟具有食用、
药用及观赏价值，是一种重要的经济淡水龟。近年来，由于
过度猎捕、贸易、栖息地破坏，野生眼斑水龟资源日益减少，
为了科学保护眼斑水龟种质资源，实现资源的可持续性利用，
开展该种的遗传多样性分析以及人工繁育具有重要意义。
[0003]分子标记是开展物种遗传分析和标记辅助选择的重
要工具，尤其是微卫星分子标记，其广泛分布于真核生物基
因组，具有多态性高，特异性好，共显性遗传，检测方便等
优点，已经成为目前应用最广泛的分子标记。开发眼斑水龟
微卫星标记对于其谱系地理格局、群体结构和遗传多样性的
分析，以及种质资源的科学保护与利用均具有重要的应用价
值。目前，尚未见眼斑水龟微卫星标记开发的相关报道。
【发明内容】
[0004]本发明的第一个目的是提供一种眼斑水龟微卫星标
记的特异性引物，其特征在于，所述的微卫星标记的特异性
引物如下所示:
[0005]微卫星位点tSb-SSR3特异性引
物:F:ACGCCTTCCCAGAGTGTC
[0006]R:ATGCCTATTTCCCCAGTG`
[0007]微卫星位点tSb-SSR12特异性引物:F:
TCTGGAGTCCATAGCTGC
[0008]R:CTCACATTGACGAAAGGC
[0009]微卫星位点tSb-SSR15特异性引
物:F:AGAACCCAGGATTTCGGAG
[0010]R:AGGAGCAGTTAGCAGGCGT
[0011]微卫星位点tSb-SSR19特异性引
物:F:AACACTTGCTTCCCTACCG
[0012]R:GCCCCTTCTTACTGACCG
[0013]微卫星位点tSb-SSR30特异性引物:F:
TTGAGGGITTAATGCCTTGT
[0014]R:GAATGGATTGGACCACAGG
[0015]微卫星位点tSb-SSR33特异性引物:F:
TGGGAGnTTGTCAITGTCTTC
[0016]R:TGCCGTTCTTATGTTATGTTCG
[0017]微卫星位点tSb-SSR36特异性引
物:F:1TTGACAGTATGGTGGGITT
[0018]R:GAAAGGAGTCAGATAGGTGGA
[0019]微卫星位点tSb-SSR48特异性引
物:F:AGGTCAITGGGCGGITTG
[0020]R:CCACTGTTGCTCATGTTGGTT
[0021]本发明的第二个目的是提供一种眼斑水龟微卫星标
记的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:
[0022](I)、提取眼斑水龟基因组DNA；
[0023](2)、以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，利用所述
的眼斑水龟微卫星标记的特异性引物中的每个微卫星位点
的特异性引物分别进行PCR扩增；
[0024](3