《分子生物学检验6》.doc

分子生物学检验 第一章 概述 随着自然科学尤其是生命科学各个学科的发展和相互交叉、渗透，医学分子生物学得以不断发展并且以迅猛的速度向临床医学各个领域渗透。在研究和认识人体的生理和病理现象、揭示疾病的病因、发病机理等方面发挥着越来越重要的作用。人类基因组计划的顺利进行和人类基因组学和蛋白组学研究的日益深入，使我们从分子生物学水平对人体生理和病理现象有了更为确切的了解。在临床医学方面，也就提出了对各种病理现象实施分子生物学检验的要求。目前，国内各大医院都在积极开展各种分子生物学研究，基因诊断日益普及，某些疾病的基因治疗也在积极研究之中。分子生物学检测手段在临床医学领域中展示出广阔的应用前景。 目前，分子生物学检验的主要对象为两类生物大分子：核酸和蛋白质。本篇主要论述有关核酸的分子生物学检验，即基因诊断。关于蛋白质的分子生物学检验，请参阅本书其他有关章节。  分子生物学检测的临床意义 核酸的分子生物学检测，即基因诊断是通过直接探查基因的存在状态或缺陷对疾病作出诊断的方法。基因诊断的探测目的物可以是DNA或RNA，前者反映基因的存在状态，而后者反映了基因的表达状态。探查的基因又分为内源基因（即机体自身的基因）和外源基因（如病毒，细菌等）两种，前者用于诊断基因有无病变，而后者用于诊断有无病原体感染。故基因诊断的临床意义也就表现在两方面：内源性基因的诊断—--根据基因的缺失或突变以分析和诊断各种遗传学疾病、进行HLA基因的多态性分析以用于器官移植的配型、肿瘤相关基因的分析以了解肿瘤的发生、发展、转移、复发等生物学性状、其他疾病相关基因的检测以了解疾病的发生、转归等；外源性基因的诊断----主要应用于各种感染性疾病病原体的基因诊断，对其进行基因型别和同源性比较以分析病原体的地区分布、基因变异和耐药性变化，以及发现新的病原体。  第二节 分子生物学实验室配置与要求 一、临床基因扩增检验实验室的建立 按照卫生部《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》规定，临床基因扩增检验实验室建立的范围和程序为：各二级以上医院依据卫生部《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》筹建实验室，然后由其法定代表人向卫生部临检中心提出技术验收申请，经由卫生部临检中心和省临检中心共同组织的专家组技术验收合格，并向省级卫生行政部门备案。在将符合规定的全部材料送达省级卫生行政部门备案后15日内，未收到省级卫生行政部门不同意见，方可开展专家组技术验收合格的临床基因扩增检验项目。 二、临床基因扩增检验实验室配置与要求 目前国内临床基因扩增检验实验室应用的实验方法有：各种基因扩增技术（以PCR为主）、各种核酸杂交技术、限制性内切酶分析技术、核苷酸序列测定和生物芯片分析等，一般均已开展PCR和核酸杂交分析。按照卫生部《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和《》， （一）临床基因扩增检验实验室区域设置原则 临床基因扩增检验实验室分为四个隔开的工作区域试剂贮存和准备区；标本制备区；扩增反应混合物配置和扩增区和扩增产物分析区。如使用全自动分析仪可合并。 （二）工作区域仪器设备配置标准 1.试剂贮存和准备区2～8℃和-15℃冰箱；混匀器；微量加样器（覆盖1～1000μL）；移动紫外灯（近工作台面）；消耗品加样器吸头（带滤）；专用工作服和工作鞋专用办公用品。 2.标本制备区2～8℃和-20℃或-80℃冰箱；高速台式冷冻离心机；混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器（覆盖1～1000μL）；可移动紫外灯（近工作台面）；超净工作台；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤）；专用工作服和工作鞋专用办公用品如需处理大分子DNA，应备有超声波水浴。 3.扩增反应混合物配置和扩增区核酸扩增仪；微量加样器（覆盖1～1000μL）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管加样器吸头（带滤）专用工作服和工作鞋专用办公用品。 4.扩增产物分析区 视检测方法不同而定微量加样器（覆盖1～1000μL）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头（带滤）；专用工作服和工作鞋专用办公用品。 临床基因扩增检验实验室技术人员必须经卫生部临检中心或省级卫生行政部门指定并经卫生部临检中心认定的机构、使用规定的统一教材进行上岗培训。培训合格者，由培训单位发给合格证书。培训合格人员名单报卫生部临床检验中心备案。 获得培训合格证书者方可从事临床基因扩增检验工作。 四、临床基因扩增检验项目和检测试剂 临床基因扩增检验实验室的各项检验项目须经由卫生部临检中心和省临检中心共同组织的专家组技术验收合格并报省级卫生行政部门备案。临床基因扩增检验实验室必须使用经国家药品监督管理局批准的临床检验试剂开展临床基因扩增检验项目。