T_GDFS 47-2024 湿地松种质资源离体超低温保存技术规范.docx
ICS65.020.01CCSB05
GDFS
广东省林学会团体标准
T/GDFS47—2024
湿地松种质资源离体超低温保存技术规范
CodeofpracticeforinvitrocryopreservationofgermplasmresourcesofPinuselliottii
2024-11-06发布2024-11-06实施
广东省林学会发布
T/GDFS47—2024
I
目次
前言 II
1范围 1
2规范性引用文件 1
3术语和定义 1
4仪器设备 1
5基本程序 2
6材料准备 2
7超低温保存 3
8提取 4
9建档 5
附录A（资料性）采收母株编号表（含示例数据） 6
附录B（资料性）超低温保存信息表（含示例数据） 7
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II
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由广东省林学会团体标准化技术委员会提出并归口。
本文件起草单位：广东省林业科学研究院。
本文件主要起草人：刘阳、王为民、王哲、曾明、郭文冰、龙永彬、赵奋成、吴惠姗、伍彩云、欧阳曦。
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1
湿地松种质资源离体超低温保存技术规范
1范围
本文件规定了湿地松（PinuselliottiiEngelm.）种质资源离体超低温保存的仪器设备、基本程序、材料准备、超低温保存、提取、建档等技术要求。
本文件适用于湿地松种质资源的离体超低温保存。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T5458液氮生物容器
GB8599大型蒸汽灭菌器技术要求自动控制型GB/T14174大口径液氮容器
GB21551.4家用和类似用途电器的抗菌、除菌、净化功能电冰箱的特殊要求GJB2253A氮气和液氮安全应用准则
JG/T292洁净工作台
YY646小型蒸汽灭菌器自动控制型YY1007立式蒸汽灭菌器
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
湿地松PinuselliottiiEngelm.
松科松属高大乔木，原产美国东南部暖带潮湿的低海拔地区，已广泛引种至我国栽培，在60多年的育种选择和驯化过程中逐渐乡土化。适生于低山丘陵地带，耐水湿，树干通直，生长势好，为我国长江以南地区极有发展前途的造林树种。
3.2
超低温保存cryopreservation
在液氮液相（-196℃)或液氮雾相（-150℃)中对离体的植物组织或细胞材料进行长期保存，在适宜条件下解冻可恢复生活力，并保持原来遗传特性。
3.3
冷冻保护剂cryoprotectant
可以保护生物器官、组织或细胞等材料免受冷冻损伤的物质，本文件中涉及的冷冻保护剂有二甲基亚砜、山梨醇等1种或多种物质的组合。
4仪器设备
4,1洁净工作台
可提供无尘洁净、无菌工作环境等级为100级（ISO等级5）的局部操作环境的箱式空气净化设备，技术指标应符合JG/T292的要求。
4.2高压蒸汽灭菌器
T/GDFS47—2024
2
对器械、辅料、玻璃器皿、溶液、培养基进行消毒灭菌的装置，根据其容积大小或使用方式的不同，技术指标应符合GB8599、YY646、YY1007的要求。
4.3冰箱
可用普通-20℃冰箱及-80℃冰箱，技术指标应符合GB21551.4的要求。4,4程序降温仪
按照规定程序要求进行降温冷冻，用于冷冻生物样品、细胞、组织或其他敏感材料。4.5液氮罐
分储运型和运输型两类，技术指标应符合GB/T5458的要求。
5基本程序
湿地松种质资源离体超低温保存应遵循的操作流程见图1。
图1湿地松种质资源离体超低温保存技术流程图
6材料准备
6.1培养基
诱导培养基为：DCR+麦芽糖15g·L-1+NAA2mg·L-1+6-BA0.63mg·L-1+KT0.61mg·L-1+植物凝胶3g·L-1，pH值为5.8±0.2；增殖培养基为：