高效液相色谱法测定甘草酸二铵注射液中有关物质.docx

高效液相色谱法测定甘草酸二铵注射液中有关物质　　【论文关键词】 甘草酸二铵；注射液；有关物质；高效液相色谱法　　【论文摘要】 目的 建立高效液相色谱检测甘草酸二铵注射液中有关物质。 方法 选用C18柱，0.01mol/L磷酸溶液[或磷酸盐缓冲溶液]—乙腈（62：38）；对其配比可用梯度法改变配比，使其理论塔板数不低于3000。流速1.0ml/min，进样量10ul。 结果 在该色谱条件下，甘草酸二铵注射液分离良好。结论 本法灵敏、准确、简便，可作为甘草酸二铵注射液有关物质的检测方法。　　甘草酸二铵 是中药甘草有效成分的第三代提取物，具有较强的与皮质醇类似饿非特异性的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用，可减少肝细胞的水肿、坏死。本研究采用HPLC法1］［一，二］，建立了甘草酸二铵注射液中有关物质的测定方法。　　1 实验材料　　1.1 药品和试剂　　仪器:SP8800型高效液相色谱仪（美国Spectra-physics公司） 色谱柱：Kromasil C18(250×4.6mm,5micro;m) 　　试剂:磷酸（分析纯）新乡市化学试剂厂; 乙腈(色谱纯)TEDIA company.INC USA； 盐酸（药用级）湖南尔康制药有限公司； 氢氧化钠（药用级） 湖南尔康制药有限公司；甘草酸二铵对照品 中国药品生物制品检验所； 供试品（自制，批号：080714），纯化水 自制。　　2方法与结果：　　2.1检测波长的选择：因紫外最大吸收波长为252nm，并根据其含量测定时选用的波长252nm，仍选此波长作为液相的检测波长。　　2.2色谱条件：选用C18柱，0.01mol/L磷酸溶液[或磷酸盐缓冲溶液]—乙腈（62：38）；对其配比可用梯度法改变配比，使其塔板数不低于3000。流速1.0ml/min，进样量10ul。　　3系统适用性试验：取本品5ml于25ml容量瓶中，加水至刻度，制成1mg/ml(或0.5mg/ml，以出峰情况定)的溶液，进样10ul，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍，实现主峰与杂质峰完全分离或达到基线分离，并且理论塔板数不低于3000。　　结果：样品(批号：080714)的主峰与杂质能够完全分离，理论塔板数为9802；有关物质为4.8%。　　4专属性试验：　　4.1 酸破坏试验：取本品5ml于25ml容量瓶中，加1mol/L盐酸溶液5ml，放置2小时后，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml中和，再加水至刻度，作为酸破坏溶液。　　4.2 碱破坏试验：取本品5ml于25ml容量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，放置2小时后，加盐酸溶液1mol/L 5ml中和，再加水至刻度，作为碱破坏溶液。　　4.3 氧化破坏试验：取本品5ml于25ml容量瓶中，加30%双氧水溶液1ml，放置2小时后，置水浴80℃加热1小时除去剩余的双氧水，再加水至刻度，作为氧化破坏溶液。　　4.4 高温破坏试验：取样品于110℃加热2小时后，精密量取5ml于25ml容量瓶中，再加水至刻度，作为高温破坏溶液。　　4.5 光照破坏试验：取样品于紫外灯下365nm波长光照4小时后，精密量取5ml于25ml容量瓶中，再加水至刻度，作为光照破坏溶液。　　取以上5种溶液，分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。分析结果。要求：各杂质峰与主成份峰分离效果良好。　　结果：各杂质峰与主成份峰分离效果良好；其中各项试验的有关物质为：专属性试验总有关物质%最大杂质%次大杂质%原样品4.82.70.98酸破坏试验5.32.40.95碱破坏试验5.02.50.98氧化破坏试验4.42.40.96高温破坏试验4.22.30.96光照破坏试验4.32.30.92　　6最小检测限：取本品，按浓度稀释法进样分析（分别按10、100、1000、10000、100000倍稀释），测定色谱系统基线。以信噪比为3：1时的进样量为检测限。计算得本条件下的甘草酸二铵的检测限。　　结果：测得最小检测限为：1.5ng/ml。　　7精密度试验：取甘草酸二铵对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释至约0.1mg/ml的溶液，进样10μl，重复进样5次，记录色谱图，结果峰面积的RSD为0.46%，表明该溶液进样精密度良好。　　8稳定性试验：取本品，制成1mg/ml的溶液，每隔2小时测定1次，考察甘草酸二铵注射液12小时的稳定性，要求：RSD〈2%。结果：其总有关物质RSD为1.2%，最大杂质RSD为0.83%，次大杂质为1.6%，其表明稳定性良好。　　9有关物质的测定： 　精密称取本品适量，用水稀释制成每1ml中约含1mg溶液，作为供试品溶液。精密称取供试品溶液适量，用水稀释成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。取对照品溶液10ul注入液相色谱仪，调节检测灵敏度