高效液相色谱法快速测定化妆品中的氢溴酸右美沙芬.PDF

高效液相色谱法快速测定化妆品中的氢溴酸右美沙芬 Application Notes_C_LC-5 黄雄风 刘绿叶 金燕 许群 赛默飞世尔科技（中国）有限公司 引言 氢溴酸右美沙芬，其结构式见图 1，是一种常见的中枢 性镇咳药的主要成分，服用者偶尔会出现头晕、头痛、 困倦、食欲不振等不良反应 1。除了在药物方面的应用， 氢溴酸右美沙芬也是化妆品的添加剂之一，并于 2009年 被列入 SN/T 2291-2009《进出口化妆品中氢溴酸右美沙芬 的测定液相色谱法》这一标准，但尚未明确氢溴酸右美 沙芬在化妆品中的作用及其使用限量 2。 测定氢溴酸右美沙芬的常用方法是高效液相色谱法，由 于该化合物同时具有紫外和荧光吸收，因此测定可用高 效液相色谱 -紫外检测法或高效液相色谱 -荧光检测法 1-3。 基于荧光检测器的高灵敏性和高选择性，本文选用高效 液相色谱 -荧光检测法测定化妆品中的氢溴酸右美沙芬。 为消除氢溴酸右美沙芬在 C8色谱柱上的拖尾问题，《进 出口化妆品中氢溴酸右美沙芬的测定液相色谱法》这一 标准采用在流动相中添加三乙胺的方法 2。但是三乙胺 会影响色谱柱的寿命，本文通过改用 C18色谱柱，并提 高水相中的酸度，可显著提高色谱峰的对称性。 仪器 Thermo ScientificTM DionexTM UltiMateTM 3000RS 四元系统 , 包括： – LPG-3400RS 四元分析泵（具备溶剂脱气功能） – WPS-3000RS 自动进样器（配置 100 μL 定量环） – TCC-3000RS 柱温箱（具备控温功能） – FLD-3000RS（检测池体积 SST-2.5 μL） Thermo Scientific Chromeleon 色谱系统控制软件 , 版本 6.80 或以上 试剂与标准品 去离子水 , 18.2 M?–cm (Thermo Scientific GenPure Pro UV- TOC，P/N 乙腈 (CH3CN), HPLC级 (Fisher Chemical，P/N AC610010040) 甲酸（CH3COONH4），HPLC 级 (上海安谱科学仪器有限公司 ) 氢溴酸右美沙芬标准品，纯度≥ 95.0%，(上海安谱科学仪 器有限公司 ) 关键词 氢溴酸右美沙芬 化妆品 高效液相色谱法 图 1. 氢溴酸右美沙芬结构式 2标准溶液的制备 标准储备液 1 准确称 0.01 g 氢溴酸右美沙芬标准品，用甲醇将其定容 到 10 mL, 得到浓度为 1000 mg/L的标准储备液 1。 标准工作溶液 取 500 μL标准储备液 1，并用甲醇定容至 10 mL，得到 浓度为 50 mg/L的标准溶液。分别取 4 mL和 2 mL浓度为 50 mg/L 的氢溴酸右美沙芬标准溶液， 用甲醇定容到 10 mL，得到浓度分别为 20 mg/L和 10 mg/L 的标准溶液； 将 10 mg/L、20 mg/L 、50 mg/L的标准溶液逐级稀释，则得 到浓度为 0.02 mg/L、0.05 mg/L 、0.1 mg/L 、0.2 mg/L 、0.5 mg/L、 1 mg/L、2 mg/L 、5 mg/L的标准溶液。 样品前处理 样品 分别称取两种不同品牌的霜剂和水剂化妆品 1 g, 于 10 mL 离心管中，加入 8 mL甲醇，用力振荡至基质均匀，用甲 醇定容至 10 mL,超声萃取 20 min，混匀，在冰箱冷冻室 (-18 ℃或更低温 )放置 10 min后于 3500 r/min下冷冻离心 5 min，将样品放至室温，取上清液经 0.22 μm有机滤膜 过滤，滤液供液相色谱测定。 样品加标 称取两份霜剂 1 g于 10 mL离心管中，分别加入 1 mL 浓度 为 5 mg/L和 50 mg/L的氢溴酸右美沙芬标准品，按照样品 前处理方法，与样品同步前处理，得到的理论加标浓度 分别为 0.5 mg/L和 5 mg/L。 色谱条件 色谱柱：Thermo Scientific Acclaim RSLC 120, C18, 2.2 μm, 3×50 mm (P/N 071605) 流动相：乙腈 /3%乙酸水溶液 , 30 : 70 ( v/v) 进样体积：2 μL 流速：0.6 mL/min 柱温：30 ℃ 检测：荧光，λEx 280 nm；λEm 310 nm 结果与讨论 色谱柱的选择 由于氢溴酸右美沙芬偏碱性 ,在分析过程中容易出现峰 形脱尾的问题。为选择合适的色谱柱用于分析化妆品中 的氢溴酸右美沙芬 ,本文比较了氢溴酸右美沙芬在 C18和 C8两种相同规格的色谱柱在同一色谱条件下的结果。结 果表明 ,氢溴酸右美沙芬在 C18色谱柱上的峰形更好 ,因 此选用 C18作为分